C2C12細(xì)胞培養(yǎng)操作指南

名稱：C2C12 小鼠成肌細(xì)胞

名稱	C2C12 （小鼠成肌細(xì)胞）
別稱	C2c12；C2-C12；C12
種屬	小鼠
生長(zhǎng)特性	貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)	成肌細(xì)胞樣
傳代融合度	70%
凍存液	55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 + 40% FBS + 5% DMSO
推薦傳代比例	1:3 - 1:4
推薦換液頻率	2-3次/周

 

 

細(xì)胞簡(jiǎn)介

圖片來(lái)源：ATCC

推薦培養(yǎng)體系：

DMEM 【VivaCell C3113】＋ 10% FBS 【VivaCell C04002】＋ 1% P/S 【VivaCell C3420】

 

 

 

細(xì)胞培養(yǎng)步驟 

待細(xì)胞融合度約70%時(shí)即可進(jìn)行傳代。

以T25培養(yǎng)瓶為例：

1. 吸出原培養(yǎng)液；加入2ml左右PBS【VivaCell C3580】，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞，吸出PBS丟棄；

2. 加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液【VivaCell C3530】，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤(rùn)所有細(xì)胞后放入培養(yǎng)箱消化約3 min，顯微鏡下觀察多半呈流沙狀，終止消化；（全程不要拍打培養(yǎng)瓶）

3. 離心，300g、3min，離心完吸出上清丟棄；

4. 加入新鮮培養(yǎng)基，將細(xì)胞吹到成單個(gè)，經(jīng)計(jì)數(shù)，均勻接種到新培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)基至5ml，放培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。

 

 

細(xì)胞誘導(dǎo)分化  

由于C2C12細(xì)胞分化很快，對(duì)于研究對(duì)理解肌肉細(xì)胞發(fā)育和修復(fù)（再生）是非常重要的。低濃度的馬血清能夠有效刺激C2C12成肌細(xì)胞向成熟細(xì)胞分化。

 

我們?cè)谶@里也簡(jiǎn)單介紹下誘導(dǎo)分化的相關(guān)知識(shí)：

01

  誘導(dǎo)體系： 

DMEM 【VivaCell C3113】＋ 馬血清 【VivaCell C2510】（常見(jiàn)比例為2%）＋ 1% P/S 【VivaCell C3420】

 

 

02

  簡(jiǎn)述細(xì)胞誘導(dǎo)步驟： 

待細(xì)胞生長(zhǎng)至融合度約過(guò)80%時(shí)。

1. 用PBS【VivaCell C3580】潤(rùn)洗細(xì)胞后吸出PBS丟棄；

2. 換誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基，后續(xù)每24h換液一次，在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)狀況。

 

03

  誘導(dǎo)時(shí)刻關(guān)鍵步驟： 

• 誘導(dǎo)前提：低代次，細(xì)胞狀態(tài)很好的C2C12細(xì)胞

• 融合時(shí)間：在其融合率剛過(guò)80%，換含有馬血清（一般是2%比例）完全培養(yǎng)液。之后需要每天進(jìn)行換液

• 誘導(dǎo)時(shí)間：正常7天內(nèi)可成功

• 提示：誘導(dǎo)的期間會(huì)有不少的死亡細(xì)胞，也有又成肌細(xì)胞的緩慢生長(zhǎng)，是正常的

• 成功的標(biāo)志：最后可以看見(jiàn)肌管，表現(xiàn)為厚的管狀結(jié)構(gòu)，有時(shí)為多核

 

圖片來(lái)源：網(wǎng)絡(luò)，侵刪
 
 

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