PBMC在免疫治療藥物研發(fā)中的應(yīng)用熱點(diǎn)問題解答

—熱點(diǎn)問題—

第一題    CD4+T細(xì)胞加普通培養(yǎng)基可以培養(yǎng)幾天？

​經(jīng)多次驗(yàn)證，分選后的CD細(xì)胞在普通培養(yǎng)基中僅能維持24~48小時(shí)，且隨著時(shí)間的延長細(xì)胞活力和狀態(tài)都在不斷的下降。

第二題    PBMC可以在體外擴(kuò)增嗎？

PBMC在沒有相關(guān)細(xì)胞因子存在情況下不能擴(kuò)增。由于PBMC是一群混合細(xì)胞，即使添加了細(xì)胞因子也只能是某些亞型細(xì)胞的擴(kuò)增，最終導(dǎo)致PBMC細(xì)胞組成比例發(fā)生改變。

第三題    分選后的細(xì)胞想要培養(yǎng)，應(yīng)該選擇什么培養(yǎng)基？普通1640是否可以？

不同亞型免疫細(xì)胞擴(kuò)增需要在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加不同的細(xì)胞因子或細(xì)胞因子組合，基礎(chǔ)培養(yǎng)基可選用1640培養(yǎng)基。為滿足客戶的不同需求，IPHASE正在陸續(xù)推出不同亞型細(xì)胞的擴(kuò)增、分化培養(yǎng)基，敬請期待！

第四題    凍存PBMC，復(fù)蘇后細(xì)胞亞群比例會改變么？

凍存PBMC復(fù)蘇后細(xì)胞亞群比例是否改變與凍存液的凍存效果有關(guān)。凍存效果好的凍存液細(xì)胞凍存復(fù)蘇后活率高，則細(xì)胞亞群比例不會發(fā)生顯著改變。IPHASE推出的PBMC凍存液細(xì)胞復(fù)蘇后活率＞90%，完全滿足后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。

第五題    陽選，陰選，適配體分選如何選擇？

若靶抗原與磁珠偶聯(lián)抗體的持續(xù)結(jié)合不影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)，比如分選細(xì)胞用于RNA或蛋白的提取，則可以考慮陽選試劑盒。反之，則需要選擇陰選或IPHASE的適配體無痕分選試劑盒。IPHASE適配體無痕分選試劑盒分選后純度＞95%，且細(xì)胞不帶磁珠和與靶抗原結(jié)合的適配體分子，兼具有陽選試劑盒和陰選試劑盒的優(yōu)點(diǎn)。

第六題    凍存PBMC能用于細(xì)胞分選試驗(yàn)嗎？

IPHASE推出的分選試劑盒均可用于凍存PBMC的細(xì)胞分選。

第七題    我公司最近想開發(fā)PBMC質(zhì)控品，想尋找一款凍存效果較好的凍存液，有推薦嗎？

IPHASE無血清細(xì)胞凍存液適用于您的需求，細(xì)胞復(fù)蘇存活率＞90%，得率＞85%，復(fù)蘇后細(xì)胞亞群比例不發(fā)生改變。

第八題    通過陽性分選試劑盒得到的細(xì)胞是否可通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測？

通過陽性分選的方法得到的細(xì)胞與磁珠連接，但所使用磁珠為納米磁珠，理論上不影響流式細(xì)胞儀的檢測。如有疑慮，可嘗試使用培養(yǎng)外加反復(fù)吹吸的方式使得細(xì)胞和磁珠脫離后再進(jìn)行流式檢測。需注意的是，流式抗體選擇請嚴(yán)格參照產(chǎn)品說明。

第九題    IPHASE的人PBMC進(jìn)行HLA分型鑒定嗎？IPHASE的人PBMC供體庫有多大？

IPHASE的人PBMC均進(jìn)行了HLA分型鑒定。IPHASE的人PBMC供體庫目前有近百個(gè)donor，庫容量正在逐漸增加，客戶可以從我們?nèi)薖BMC供體庫中選擇適合自己實(shí)驗(yàn)的PBMC。

第十題    凍存PBMC復(fù)蘇操作上應(yīng)注意哪些細(xì)節(jié)？

首先，需要37℃預(yù)熱復(fù)蘇培養(yǎng)基。其次，水浴解凍細(xì)胞時(shí)要注意管內(nèi)細(xì)胞融化狀態(tài)，當(dāng)融化至少量冰晶時(shí)終止水浴。最后，離心力、離心時(shí)間需按隨貨說明書建議進(jìn)行參數(shù)設(shè)置。

十一題    IPHASE人CD3/CD28+T細(xì)胞活化擴(kuò)增試劑盒刺激細(xì)胞擴(kuò)增最長時(shí)間是多少？

IPHASE人CD3/CD28+T細(xì)胞活化擴(kuò)增試劑盒刺激細(xì)胞擴(kuò)增我們只驗(yàn)證到15天，擴(kuò)增效率超千倍，此時(shí)細(xì)胞仍保持良好狀態(tài)，完全可以進(jìn)一步延長時(shí)間進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)。

十二題    ​IPHASE提供的凍存人PBMC細(xì)胞有哪些規(guī)格？

IPHASE可提供凍存、新鮮兩種狀態(tài)的細(xì)胞，且包含5million/支，10 million/支，50 million/支等多種規(guī)格。