大小鼠Von Frey測(cè)痛實(shí)驗(yàn)方法全面解析：操作技巧與注意事項(xiàng)

Von Frey，也被稱為纖毛機(jī)械刺激針，它通過在皮膚上施加細(xì)絲刺激來評(píng)估觸覺敏感性。這種測(cè)試方法常被用作衡量外周和/或中樞敏化狀態(tài)下異常疼痛的替代指標(biāo)，在疼痛研究領(lǐng)域廣泛應(yīng)用于各種動(dòng)物模型。

嚙齒動(dòng)物的臨床前模型對(duì)于探索病理生理機(jī)制以及尋找新型鎮(zhèn)痛藥物而言，具有不可估量的價(jià)值。然而，嚙齒動(dòng)物的疼痛評(píng)估往往充滿挑戰(zhàn)。通常，它們對(duì)機(jī)械或熱刺激的反應(yīng)變化，被用作衡量疼痛敏感性的行為指標(biāo)。

在Von Frey測(cè)試中，我們會(huì)對(duì)嚙齒動(dòng)物身體的特定部位施加點(diǎn)狀刺激，并記錄下引發(fā)其撤回反射所需的刺激強(qiáng)度。這一過程通常借助具有特定彎曲力的校準(zhǔn)光纖來實(shí)現(xiàn)。機(jī)械敏感性測(cè)試則涉及到使用細(xì)校準(zhǔn)的塑料絲對(duì)后爪足底表面施加刺激。機(jī)械撤回閾值被定義為能夠引發(fā)撤回反射的最小規(guī)格細(xì)絲，目的在于測(cè)量機(jī)械傷害感受，以評(píng)估動(dòng)物檢測(cè)有害刺激的能力。一旦這種反應(yīng)發(fā)生，所需的壓力會(huì)以克為單位進(jìn)行記錄，這個(gè)值被視為個(gè)體的閾值。目前，已有電子測(cè)痛儀問世，它能夠連續(xù)施加力度，并提供連續(xù)尺度的腳爪撤退閾值。

一、實(shí)驗(yàn)操作流程

步驟a：將小鼠放入高架線柵的測(cè)試室內(nèi)。
步驟b：讓每只小鼠在測(cè)試室內(nèi)靜置一個(gè)小時(shí)，以便它們適應(yīng)環(huán)境。
步驟c：將小鼠放置在寬規(guī)格的金屬絲網(wǎng)表面上，首先測(cè)試其左后爪。通過從網(wǎng)的下側(cè)將Von Frey細(xì)絲施加到小鼠后爪的足底表面來進(jìn)行測(cè)試。當(dāng)刺激達(dá)到閾值時(shí)，小鼠會(huì)通過彈開爪子來作出反應(yīng)。起始測(cè)試時(shí)，我們采用0.6g的Von Frey細(xì)絲。將細(xì)絲輕輕按壓在后爪的足底表面，施加足夠的力使細(xì)絲彎曲，并保持接觸1-2秒。根據(jù)對(duì)前一個(gè)細(xì)絲的反應(yīng)，我們將選擇下一個(gè)細(xì)絲的尺寸。如果沒有觀察到撤回反應(yīng)，則選用更高一級(jí)的細(xì)絲；若出現(xiàn)撤回反應(yīng)，則選用更低一級(jí)的細(xì)絲。通過不斷增加不同硬度的Von Frey細(xì)絲規(guī)格，并重復(fù)此過程，直至刺激引發(fā)后爪縮回或舔舐行為。我們將持續(xù)施加細(xì)絲，直至對(duì)同一只爪子進(jìn)行五次測(cè)試，每次測(cè)試之間至少間隔2分鐘。
步驟d：隨后，用相同的方法對(duì)右后爪進(jìn)行測(cè)試。

二、測(cè)試階段

測(cè)試1：在適應(yīng)環(huán)境后的24小時(shí)，使用與適應(yīng)期相同的程序，再次使用Von Frey細(xì)絲對(duì)小鼠進(jìn)行測(cè)試。
測(cè)試2：在適應(yīng)環(huán)境后的48小時(shí)，再次按照適應(yīng)期的程序，使用Von Frey細(xì)絲對(duì)小鼠進(jìn)行測(cè)試。

在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，我們將多次重復(fù)測(cè)試，并詳細(xì)記錄每次測(cè)試的結(jié)果。此外，我們還將檢測(cè)動(dòng)物的縮爪潛伏期，即在藥物注射前（給藥前）和注射后，分別測(cè)量同一只動(dòng)物的同側(cè)（結(jié)扎側(cè)）和對(duì)側(cè)（未結(jié)扎側(cè)）爪子的撤回閾值。最終的結(jié)果將以ΔPWT（克）的形式表示，即對(duì)側(cè)潛伏期減去同側(cè)潛伏期。