微核試驗(yàn)檢測方法—流式細(xì)胞術(shù)

微核（micronucleus,簡稱MCN），也叫衛(wèi)星核，是真核生物細(xì)胞在有絲分裂后期由于染色體片斷喪失著絲粒從而游離于細(xì)胞質(zhì)中的一種異常結(jié)構(gòu)，是染色體畸變的一種表現(xiàn)形式。微核是細(xì)胞有絲分裂后期染色體有規(guī)律地進(jìn)入子細(xì)胞形成細(xì)胞核時(shí)，仍留在細(xì)胞質(zhì)中的整條染色單體或染色體的無著絲粒斷片或環(huán)。這些片段或染色體在分裂末期不能進(jìn)入主核，在子細(xì)胞進(jìn)入下一次分裂間期時(shí)，便濃縮成主核之外的小核，即微核。目前有輻射、化學(xué)誘變劑等較多理化因素可引起染色體斷裂，且均可導(dǎo)致細(xì)胞分裂從而產(chǎn)生微核現(xiàn)象。

一、 微核試驗(yàn)的簡介

微核試驗(yàn)是一種建立在細(xì)胞水平上分析DNA損傷的技術(shù)，其目的是以微核作為遺傳毒性檢測終點(diǎn)，用于檢測染色體斷裂劑及非整倍體誘導(dǎo)劑，是目前公認(rèn)的篩選致突變物的主要方法之一，在化合物遺傳毒性評(píng)價(jià)系統(tǒng)中占據(jù)著重要的地位。
陰性對(duì)照
陽性對(duì)照

微核試驗(yàn)可分為體外微核及體內(nèi)微核試驗(yàn)，體外微核試驗(yàn)常以CHL、V79及CHO-K1細(xì)胞作為試驗(yàn)系統(tǒng)，而體內(nèi)微核試驗(yàn)使用較多的是嚙齒類動(dòng)物的嗜多染紅細(xì)胞（PCE）或者網(wǎng)織紅細(xì)胞（RET)。PCE或RET是有絲分裂后期的紅細(xì)胞由幼年發(fā)展為成熟紅細(xì)胞過程中的一個(gè)階段，此時(shí)紅細(xì)胞的主核已排出，而微核仍保留在細(xì)胞質(zhì)中并十分易于辨認(rèn)。因此，嗜多染紅細(xì)胞或網(wǎng)織紅細(xì)胞是體內(nèi)微核試驗(yàn)的首選細(xì)胞群。
二、 流式體內(nèi)微核檢測

除了人工閱片等常規(guī)檢測方法外，流式細(xì)胞術(shù)等自動(dòng)化檢測方法也被用于微核檢測。流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry)檢測方法是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的定量測定細(xì)胞和亞細(xì)胞成分的方法。該方法通過流式細(xì)胞儀以激光束為光源，將待測樣品進(jìn)行熒光染色，然后在液體載體里將單個(gè)細(xì)胞通過激光束產(chǎn)生的熒光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，最終通過儀表顯示來達(dá)到定量測定的目的。

利用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行體內(nèi)微核鑒定則是由于與成熟的紅細(xì)胞相比，未成熟的網(wǎng)織紅細(xì)胞仍然含有RNA和某些表面蛋白質(zhì)（比如轉(zhuǎn)鐵蛋白受體，也稱為CD71），因此可用RNase降解RNA以排除RNA的干擾，且不同抗體可用于區(qū)分不同細(xì)胞或成分，如CD71抗體可區(qū)分網(wǎng)織紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞，CD61抗體可用于排除血小板的干擾，而后可用PI染液對(duì)DNA進(jìn)行染色，從而輕易鑒別出微核。流式體內(nèi)微核檢測流程如下：
三、相關(guān)產(chǎn)品

流式細(xì)胞術(shù)微核檢測具有檢測速度快、結(jié)果客觀可靠及可滿足高通量檢測要求等特點(diǎn)，因此，IPHASE作為體外研究生物試劑引領(lǐng)者，憑借先進(jìn)的設(shè)備，專業(yè)的技術(shù)人員和多年研發(fā)的經(jīng)驗(yàn)，現(xiàn)正在開發(fā)小鼠體內(nèi)微核試驗(yàn)流式檢測試劑盒。小鼠染毒處理后，于不同時(shí)間點(diǎn)收集外周血，便可用該試劑盒進(jìn)行流式微核檢測。試劑盒提供了用于小鼠外周血流式微核檢測的主要試劑，包括抗凝劑、RNase溶液、CD71、CD61熒光抗體、生物標(biāo)準(zhǔn)品及PI染液等，且試劑盒各組成成分均經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量檢測，實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性好。

與體內(nèi)微核檢測試驗(yàn)一樣，體外微核檢測在預(yù)測致癌危險(xiǎn)性、檢測非整倍體誘發(fā)劑及其它遺傳危害方面也具有重要的地位。IPHASE現(xiàn)已開發(fā)出了包括采用人工閱片方法的體外微核試驗(yàn)試劑盒在內(nèi)的一系列專門用于體外遺傳毒性研究的產(chǎn)品，助力廣大客戶進(jìn)行體外遺傳毒理學(xué)研究。
 

名稱	規(guī)格
體外微核試驗(yàn)試劑盒	5mL*32 test
遺傳毒性Ames試劑盒	100/150/200/250 dishes
遺傳毒性Mini-Ames試劑盒	6孔板*24板/6孔板*40板
微量波動(dòng)Ames試劑盒	16*96 wells/ 4*384 wells
UMU遺傳毒性試劑盒	96 wells
TK基因突變?cè)噭┖?/td>	20ml*36 test
HGPRT基因突變?cè)噭┖?/td>	20ml*36 test
體外染色體畸變?cè)噭┖?/td>	5mL*30 test
彗星試驗(yàn)試劑盒	20/50 test

IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，推出了多領(lǐng)域、多種類的高端科研試劑，為藥物早期研發(fā)提供篩選工具，為生命科學(xué)領(lǐng)域的探索提供新材料、新方法和新手段，為食品、藥品、化學(xué)品等的遺傳毒性研究提供便捷產(chǎn)品，望廣大科研工作者來電咨詢，咨詢熱線400-127-6686。