HFD+CCl4誘導(dǎo)的代謝功能障礙相關(guān)性脂肪肝炎MASH(NASH)小鼠介紹與應(yīng)用

代謝功能障礙相關(guān)性脂肪肝炎（MASH），之前稱為非酒精性脂肪肝炎（NASH），是一種慢性肝臟疾病。這種疾病通常源于代謝障礙相關(guān)性脂肪肝�。∕ASLD）、肥胖或糖尿病等，導(dǎo)致肝臟脂肪積累，異常的脂肪堆積可進(jìn)一步引起炎癥。如果沒有及時(shí)干預(yù)會(huì)發(fā)展成肝臟纖維化，可能會(huì)進(jìn)展為肝硬化或肝癌（HCC）^[1]。今天，小賽要為大家介紹一款最新上線的HFD+CCl4誘導(dǎo)的MASH（NASH）小鼠。

HFD+CCl4誘導(dǎo)的MASH(NASH)小鼠構(gòu)建方式
60%的高脂飲食（HFD）飼養(yǎng)12周的C57BL/6小鼠呈現(xiàn)肥胖、高血脂等癥狀，通過為期4周的CCL4誘導(dǎo)可使肝臟發(fā)生纖維化病變。Resmetirom（瑞司美替羅）每天灌胃治療四周后，可顯著降低高血脂、肝臟脂質(zhì)堆積、纖維化等表型。
 

圖1 HFD+CCl4誘導(dǎo)的MASH(NASH)小鼠研究概況

HFD+CCl4誘導(dǎo)的MASH(NASH)小鼠藥效數(shù)據(jù)

圖2 給藥期間小鼠體重的變化曲線及試驗(yàn)終點(diǎn)肝重指標(biāo)

HFD誘導(dǎo)12-16周的小鼠體重和肝重均升高，其中體重可達(dá)40g以上。治療四周后，Resmetirom可顯著降低動(dòng)物體重和肝重。*P<0.05，與高脂飲食對(duì)照組差異顯著。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤。*P<0.05視為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，采用單因素方差分析。
 

圖3 小鼠總膽固醇（TC）水平、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平及低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平

圖4 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）水平及天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平

治療期間給予CCL4后檢測(cè)肝功指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)CCL4顯著提高了ALT和AST的水平，治療組的Resmetirom降低了CCL4誘導(dǎo)的血清中ALT和AST水平。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，n=5。#P<0.05、##P<0.005與正常對(duì)照組比較；*P<0.05、**P<0.005與高脂飲食+CCL4組比較，采用單因素方差分析。
 

圖5 小鼠肝臟病理組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果：HE染色、NAS評(píng)分、ORO染色與PSR染色

4周治療后，Resmetirom保護(hù)了HFD和HFD+CCL4誘導(dǎo)的肝臟脂肪變性和氣球樣變。藍(lán)色箭頭表示脂肪變性，綠色箭頭表示小葉炎，黑色箭頭表示氣球樣變。脂肪變性（0-3分）、小葉炎癥（0-3分）、氣球樣變（0-2分）、NAS評(píng)分（0-8分）。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，n=5。
 

圖6 肝α-平滑肌肌動(dòng)蛋白α-SMA(Acta2)mRNA及一型膠原蛋白（Collagen 1α1）mRNA的水平表達(dá)
 

4周治療后，Resmetirom抑制了由HFD+CCL4顯著誘導(dǎo)的肝纖維化標(biāo)志物的mRNA水平。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤，n=5。*P<0.05，**P<0.005，****P<0.001，采用單因素方差分析。
 

總  結(jié)

高脂飲食（HFD）誘導(dǎo)12周的小鼠（DIO）較普通飼料喂養(yǎng)的小鼠增加了體重和肝臟的重量。DIO小鼠血清中的TC、HDL-C和LDL-C的水平顯著增加，較好地模擬了MASH的癥狀。DIO小鼠與四氯化碳（CCL4）的組合可以加速和惡化MASH小鼠模型的病理過程，HFD+CCL4組較HFD組顯著升高了血清中ALT和AST的水平，代表CCL4誘導(dǎo)肝臟發(fā)生了進(jìn)一步的損傷。CCL4縮短了誘導(dǎo)時(shí)間，并加重了DIO小鼠肝纖維化。這種模型廣泛用于臨床前藥效研究以評(píng)估新藥對(duì)MASH的治療和保護(hù)作用。Resmetirom對(duì)DIO+CCL4誘導(dǎo)的MASH模型具有保護(hù)和治療作用，可以有效減少脂肪變性和纖維化。

以上模型為研究代謝功能障礙相關(guān)性脂肪肝炎提供了重要工具，有助于更深入地理解這種疾病的發(fā)病機(jī)制，并為開發(fā)新的治療方法提供可能。此外，賽業(yè)生物還提供多種用于代謝和心血管疾病研究的基因編輯和誘導(dǎo)模型，以滿足研發(fā)人員在相關(guān)研究領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)需求。

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代謝和心血管疾病精選模型推薦——誘導(dǎo)造模

參考文獻(xiàn)：
[1] Shuang Wang and Scott L. Found in Translation – Fibrosis in Metabolic Dysfunction-Associated Steatohepatitis (MASH). Sci Transl Med. 2023 Oct 4; 15(716).