大小鼠Von Frey測痛實驗：方法精要與應用總結

Von Frey纖維，亦稱纖毛機械刺激針，是一種評估皮膚觸覺敏感性的工具，其應用能反映在外周或中樞敏化狀態(tài)下異常疼痛的存在。該技術在疼痛研究領域跨物種應用廣泛，尤其在嚙齒類動物的臨床前模型中，成為探索病理生理機制及新鎮(zhèn)痛藥物研發(fā)的寶貴資源。

然而，準確評估嚙齒動物的疼痛感受頗具挑戰(zhàn)性。通常，通過監(jiān)測其對機械或熱刺激的行為反應變化來量化疼痛敏感性。Von Frey測試便是一種具體方法，它涉及在嚙齒動物身體特定區(qū)域施加精確的點狀刺激，并記錄觸發(fā)撤回反射所需的刺激強度。這一過程采用具有特定彎曲力的校準光纖完成，主要聚焦于后爪足底，以細校準塑料絲模擬機械刺激。機械撤回閾值被定義為能夠引發(fā)撤回反射的最小細絲規(guī)格，旨在評估動物對有害刺激的感知能力。一旦反應發(fā)生，所需壓力以克為單位記錄，作為個體的疼痛閾值指標。此外，現(xiàn)代電子測痛儀的引入，實現(xiàn)了連續(xù)施力并提供了更為精細的腳爪撤退閾值測量。

實驗流程概覽：

1. 準備階段：將小鼠置于高架線柵測試室內，靜置一小時以適應環(huán)境。
2. 測試執(zhí)行：
   • 將小鼠放在金屬絲網(wǎng)上，首先測試左后爪。使用0.6g起始規(guī)格的Von Frey細絲，從網(wǎng)下側輕觸小鼠后爪足底，保持1-2秒接觸時間。根據(jù)小鼠反應調整細絲規(guī)格，無反應則遞增，有反應則遞減，直至找到引發(fā)撤回或舔舐行為的細絲。重復此過程5次，每次間隔至少2分鐘。
   • 對右后爪重復上述測試流程。

測試階段安排：

• 測試1：在適應環(huán)境后24小時，按照前述步驟重新測試小鼠。
• 測試2：再隔24小時（即適應后48小時），重復上述測試流程。

整個實驗過程中，需多次重復測試并記錄結果，特別關注藥物注射前后同側（如結扎側）與對側爪子在縮爪潛伏期上的變化，以ΔPWT (g)形式表示，即對側潛伏期減去同側潛伏期的差值，從而量化疼痛敏感性的變化。