人前列腺癌細(xì)胞(Lncap)培養(yǎng)注意要點(diǎn)

該細(xì)胞不形成均一的單層而是成簇生長(zhǎng)，所以傳代的時(shí)候要反復(fù)吹打形成單個(gè)細(xì)胞；該細(xì)胞貼壁不牢，達(dá)不到匯合狀態(tài)，而且會(huì)使培養(yǎng)基迅速變酸；傳代后48h內(nèi)不要擾動(dòng)，一定要保持培養(yǎng)瓶靜止。如果此時(shí)挪動(dòng)培養(yǎng)瓶，會(huì)使大部分細(xì)胞從瓶底脫落。如果出現(xiàn)此種情況，需要重新孵育24~48h使細(xì)胞重新貼壁，細(xì)胞貼壁后可更換培養(yǎng)基。

細(xì)胞名稱：人前列腺癌細(xì)胞（STR鑒定正確）
細(xì)胞簡(jiǎn)稱：Lncap
產(chǎn)品貨號(hào)：TCH-C238
種屬來源：人
組織來源：前列腺
疾病特征：前列腺癌
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
培養(yǎng)體系：RPMI-1640+10%FBS+1%P/S
傳代比例：1:2-1:3，每2-3天換液一次
傳代周期：72-96 h
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳，溫度：37℃
凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲(chǔ)存
質(zhì)量檢測(cè)：細(xì)菌、真菌、支原體檢測(cè)均為陰性

Lncap細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1. 該細(xì)胞并不形成一致的單層，而是形成集落

2. 該細(xì)胞會(huì)使培養(yǎng)基快速變酸，且生長(zhǎng)緩慢，故傳代后 48 小時(shí)內(nèi)不應(yīng)擾動(dòng)

3. 傳代后細(xì)胞貼壁較慢，48h 內(nèi)不要擾動(dòng)

4. 細(xì)胞貼壁性不強(qiáng)，普通 TC 處理的培養(yǎng)瓶或皿不能使細(xì)胞很好的貼壁，培養(yǎng)難度較高。 建議使用 Corning 的 cellbind 細(xì)胞培養(yǎng)瓶，或者使用多聚-L-賴氨酸溶液對(duì)培養(yǎng)底面包被后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)

5. 常溫運(yùn)輸途中，多數(shù)細(xì)胞會(huì)從培養(yǎng)瓶底分離，懸浮在培養(yǎng)基中，請(qǐng)收集懸浮細(xì)胞離心 后重新接種。

6. 收貨后，如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞漂浮或成團(tuán)，可按下面的步驟進(jìn)行處理：

（1）將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的所有培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)入無菌離心管，離心收集細(xì)胞（1200rpm 3min）；
（2）去掉上清，用PBS重懸細(xì)胞，將細(xì)胞收集到一個(gè)離心管中，PBS震動(dòng)離心管混勻即可，再次離心（1200rpm 3min）；

（3）去掉上清，加入1ml左右0.25%胰酶，重懸混勻細(xì)胞。震動(dòng)離心管，混勻即可，不能吹打。放入培養(yǎng)箱，消化細(xì)胞，消化時(shí)間3分鐘左右；

（4）消化完畢后，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散。加入5ml含血清的培養(yǎng)基，混勻后終止消化，離心（1200rpm 3min）；

（5）去掉上清，加入5-7ml相應(yīng)完全培養(yǎng)基混勻，輕輕/反復(fù)吹打細(xì)胞，接種于無菌T25瓶中（接種容器應(yīng)提前用對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基浸潤(rùn)）。