液閃測量技術(shù)在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用及前景展望

液閃測量拄木是一種利用液體閃爍計數(shù)囂進(jìn)行體外放射性測量的技木．最有利于探測離體樣品中³H、¹⁴C等發(fā)射的穿透力租弱的軟β射線。具有靈敏度高、特異性強等優(yōu)點。這一技木的應(yīng)用使中醫(yī)藥的研究更加深^，并已成為溝通傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的渠道，為中酉醫(yī)結(jié)合的研究作出了很大的貢獻(xiàn)。迄今，該技木已應(yīng)用于中醫(yī)藥研究的各個領(lǐng)域，現(xiàn)將有關(guān)資料綜述于下：

 

在已建立的40多種免疫檢測中草藥有效成分的方法中，放射免疫分析占70％以上．由于多采用H標(biāo)記。因而液閃測量技術(shù)就顯得尤為重要。如青蒿素青蒿罱檢測方法的建立國外有學(xué)者應(yīng)用該技術(shù)建立了測定鈣質(zhì)生成植物中的總VD衍生物的方法．等等我國中草藥資源豐富，尋找新的活性成分是中藥研究的一項艱巨任務(wù)。

近年來液閃測量技術(shù)在中藥藥理研究中的應(yīng)用更加廣泛。它不僅可以用來測定生藥及其在人體中的有敢成分，以及用藥后人體各微量生物活性物質(zhì)含量變化，而且為中藥藥理研究深到分子水平做出了很大貢獻(xiàn)。

在中藥有效成份的研究中，太棗、茵胨、丹參等中藥中環(huán)核昔酸的含量，哈士蟆油中的睪酮、孕酮、雌二醇等甾體激素等均可用液閃進(jìn)行測量。周文浴等人以³H小檗堿³H．誅片為示蹤劑．觀察大鼠外敷中藥消炎是的透皮吸收，用液體閑輯計數(shù)器檢測用藥大鼠血}瘦臟器組織、糞、尿的艘射性，結(jié)果表明：³H冰片的可能透皮量不足外敷總量的5％，外敷的³H小堿也大半留在體外；提示外敷中藥是能部分透過皮膚的，但透皮量有限．且因組分不同而異。推測外敷中藥對病變組織除可起部分直接作用外，可能還通過其它機制起作用。

根據(jù)放射免疫原理．應(yīng)用液閩測量拄術(shù)可測定體外樣本中血栓素．前列腺素、環(huán)磷酸腺苷、宴質(zhì)酮等微量物質(zhì)含量。觀察用藥后這些微量物質(zhì)含量變化是闡明中藥作用機理及指導(dǎo)臨床用藥的重要依據(jù)。鄧常青等通過檢測兔腦缺血再灌注損傷模型腦血栓紊TX＆6-酮前列腺素及血漿和氈環(huán)磷酸晾苷的含量，對組成益氣活血方的黃芪和活血方的作用機理進(jìn)行了比較研究，發(fā)現(xiàn)活血方和益氣活血方均可抑制兔腦映血再滟注后腦TX的升高，提高腦6一酮一前列腺索R含量。活血方還可抑制腦cAMP的升高，黃芪則對此無明顯影響。提示益氣活血法通過改善腦局部TXA2／PGI：平衡而起作用，且主要為活血藥物作用在研究周真方老年大鼠海馬和下丘腦一垂儺一腎上腺皮質(zhì)軸(HPA軸)的作用中通過檢測血漿皮質(zhì)酮含量，發(fā)現(xiàn)固真方能顯著降低老年大鼠增高的血漿皮質(zhì)醇含量，結(jié)臺糖皮質(zhì)澈素受體分析結(jié)果，加深了對諼方延緩老年大鼠海馬和HPA軸退化作用的認(rèn)識。余林中等人在研究瘟膈散解熱作用機理中發(fā)現(xiàn)，該藥能抑制中樞性發(fā)熱介質(zhì)PGB、cAMP合成釋放，繼而影響丘腦下部體溫調(diào)節(jié)中樞。

 

近年來，與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)臺，液閃測量技術(shù)在中藥藥理研究深入到分子水平的過程中發(fā)揮了很大作用。李應(yīng)東等人以外周血淋巴細(xì)咆非程序DNA臺成(UDS)為觀察指標(biāo)，用³H標(biāo)記DNA合成前體物質(zhì)，通過液閃測量研究了莪木和硫酸鎳的遺傳毒性教應(yīng)廈莪術(shù)對硫酸鎳誘導(dǎo)的^外周血淋巴細(xì)胞UDS的影響．發(fā)現(xiàn)莪術(shù)在一定劑量時可明顯減輕硫酸鎳對外周血淋巴細(xì)胞DNA的損傷，而其本身無致突變作用。但當(dāng)莪術(shù)劑量達(dá)到1g／ml時，對DNA的修復(fù)造成已造成抑制。還有作者I在對抗衰老中藥原研究中，以³H甲基摻入法測定大鼠腦中DNA甲基化酶活性，發(fā)現(xiàn)在長期服用神方補臂生血藥后，該酶比活力增高，酶的熱穩(wěn)定性和對NaC[的耐受力略有增強。并結(jié)臺蛋白成分的分折說明神方補腎生血藥可改變太鼠腦DNA甲基化酶活性和酶學(xué)性質(zhì)．從而影響DNA甲基化水平，可能是該藥抗衰老作用的途徑之一。還有作者采用H摻入法檢鍘DNA聚臺酶和逆轉(zhuǎn)錄酶活性，證實了疏肝利膽沖劑具有明顯的抑制以上兩種酶的作用，為臨床用藥提供了實驗依據(jù)。

 

中醫(yī)基礎(chǔ)理論具有豐富的內(nèi)涵，但目前的中醫(yī)還不縣備用準(zhǔn)確的理論概括其基術(shù)特征的能力，在從經(jīng)驗醫(yī)學(xué)向科學(xué)醫(yī)學(xué)轉(zhuǎn)化的過程中應(yīng)用現(xiàn)代化的檢測技術(shù)故方法為中醫(yī)服務(wù)是十分必要且行之有敬的。在舌苔原理的緣合實驗研究中，發(fā)現(xiàn)厚苔者Ac MP、cGMP同時升高，提示其細(xì)胞分裂和分化加速，而角化脫落相對延緩；病理白薄菩兩者均低于正常，薄黃苔兩者均高于正常，提示分裂和分化處于不同水平的相對平衡；剝脫者cAMP和eGMP水平亦較高則可能與某些母煮致使細(xì)胞過早變性壞死有關(guān)。

錢汝紅等人在內(nèi)燥和內(nèi)濕的實驗研究中，對五組大鼠(常體寒體、熱俸、內(nèi)燥組、內(nèi)濕組)分別進(jìn)行研究，將其外周血淋巴細(xì)胞DNA經(jīng)紫外線照射損傷，采用H摻入法培養(yǎng)后收集細(xì)胞液閌測定。通過觀察淋巴細(xì)胞DNA損傷后修復(fù)能力的差異，進(jìn)一步探討體質(zhì)類型及其轉(zhuǎn)變時的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)。結(jié)果表明：內(nèi)燥組的³H TdR揍入值小于熱體組，內(nèi)濕組的³H -TdR摻入值小于寒體組，差異都顯著，提示DNA的³H TdR摻入值可作為區(qū)別正常體質(zhì)和病理體質(zhì)的指標(biāo)之一。

 

在針刺研究中，應(yīng)用液閑測量針剌后，體灘及組織中釬校苷酸、血栓索、前列環(huán)索等微量物質(zhì)古量的變化，同樣有助于針剌作用機理的研究。有研究表明。針剌內(nèi)關(guān)穴可抑制缺血心肌細(xì)胞內(nèi)cAMP過度升高，可防止因細(xì)胞膜cd通透性增大而致的心率失常，減少心肌耗氧量；降低延髓組織中Ac MP、cGMP含量，通過訶整延髓心血管中樞，改善急性心肌靛血病人的心功能狀態(tài)；降低血中cAMP音量，說明針蒯內(nèi)關(guān)可抑制機體過度強烈的應(yīng)激反應(yīng)。港免心臟負(fù)擔(dān)加重．利于缺血心肌的恢復(fù)。另有研究表明“針刺心經(jīng)經(jīng)脈和針觸肺經(jīng)經(jīng)脈均有降壓作用，且針剌心經(jīng)降壓強度大于針刺肺經(jīng)。其中升高血清前列環(huán)索水平是針刺降壓作用機理之一。

 

中醫(yī)臨床以辨證施治為本，臨床醫(yī)生根據(jù)對患者望、聞、問、切所得資料，用八綱、臟腑辯證綜臺納丹型，又依據(jù)不同分型予以應(yīng)治療，應(yīng)用液閃測量技術(shù)對中醫(yī)疾病分型進(jìn)行相關(guān)檢測以及對疾病病因、病理轉(zhuǎn)歸、預(yù)后予以科學(xué)分析．不僅為中醫(yī)臨床辨證施治提供科學(xué)依據(jù)，也闡明了中醫(yī)辨證實質(zhì)和藥物作用環(huán)節(jié)。

應(yīng)用液閑測量技術(shù)檢測中醫(yī)辨證患者體渡中活性物質(zhì)或其它功能指標(biāo)，并以此為辨證分型的基礎(chǔ)觀察其與中醫(yī)分型的關(guān)系。如：對虛寒、虛熱證患者尿PGE2，PGF2排出量的臨床觀察，發(fā)現(xiàn)虛寒患者尿PGE2排出量下降：虛熱患者尿PGE2排出量升高PGF2無明顯變化．PGE/PGF2值升高。提示PGE2、PGF2與中醫(yī)寒熱辨證密切相關(guān)。

 

近年米，科研工作者應(yīng)用液閃泓量技術(shù)在中醫(yī)藥研究中做了大量實際工作，并已探人到中醫(yī)的理、法、方、藥等各個領(lǐng)域，為中醫(yī)臨床辨證施治提供了科學(xué)依據(jù)，為進(jìn)一步深人研究獲得了有價值的資料雖然液閃測量技術(shù)具有放射性同位素廢物處理困難，試劑成本較貴等不足之處，但由于其快速、精確、專一、樣品不需純化、超微量(最小測量值可達(dá)10 ^-15水平)等突出優(yōu)點，仍無法被其它方法取代。而且．該技術(shù)與分子生物學(xué)等其它相關(guān)技術(shù)的聯(lián)合應(yīng)用．使得中醫(yī)藥研究更加探人．甚至滲透到一些過去無法研究的課題。

綜上．積極地運用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)促進(jìn)中醫(yī)自身發(fā)展，造已經(jīng)成為絕大多數(shù)當(dāng)代中醫(yī)人士的共識。液閃測量技術(shù)正在中醫(yī)藥研究中起著越來越大的作用，相信隨著研究的深入和發(fā)展。它必將為發(fā)掘中醫(yī)藥學(xué)寶，以及中醫(yī)現(xiàn)代化做出更大貢獻(xiàn)。
（天津中醫(yī)學(xué)院   王虹）