高通量植物（轉(zhuǎn)）基因檢測(cè)的利器---植物材料直接PCR技術(shù)

 

摘要： 北京百泰克生物技術(shù)有限公司暨推出通用植物總RNA提取試劑盒（RP3301）成功解決了各種難提植物RNA的問題后，新近又針對(duì)高通量植物DNA的提取擴(kuò)增推出了最新產(chǎn)品——植物直接PCR試劑盒（PR7501），該試劑盒不需要液氮和研磨杵研磨，也不需要鋼珠破碎，更不借助任何特殊的儀器設(shè)備，方法及其方便快捷。

      眾所周知，在正向遺傳學(xué)的基因定位，植物品質(zhì)和品種鑒定，或者是植物有效成分檢測(cè)，以及轉(zhuǎn)基因檢測(cè)等，都需要高通量植物的DNA提取，然后PCR檢測(cè)。尤其是在基因圖位克隆中，需要構(gòu)建一個(gè)大的群體（少則幾千株，多則上萬株），然后提取DNA，PCR方法篩選性狀的連鎖標(biāo)記（SSR，RAPD等），最后測(cè)序克隆基因。傳統(tǒng)方法在DNA提取中，都要液氮研磨樣品，然后氯仿抽提，最后再PCR。上千株系DNA的提取就需要幾周的時(shí)間。一些公司進(jìn)行改進(jìn)，開發(fā)了相對(duì)簡(jiǎn)單些的方法，用96孔吸附板進(jìn)行提取，完成整個(gè)實(shí)驗(yàn)也需要大約1個(gè)小時(shí)；也有些公司在96孔深孔板中加入鋼珠或者其他比重大的金屬小珠幫助破碎，直接裂解后取上清做PCR，能將時(shí)間縮短至半小時(shí)，但是需要借助專用的震蕩器，而且鋼珠的使用成本很高；也有的公司不借助鋼珠，而提供小的研磨杵，在PCR管人工研磨后裂解取上清進(jìn)行PCR，顯然耗費(fèi)的人工時(shí)間比較多，而且也容易相互污染。

 

      以上的方法對(duì)于大規(guī)模的基因或轉(zhuǎn)基因檢測(cè)顯然不理想，不僅時(shí)間長(zhǎng)而且易污染！國內(nèi)外很多知名的公司紛紛投入到改進(jìn)新技術(shù)的研發(fā)中！北京百泰克生物技術(shù)有限公司暨推出通用植物總RNA提取試劑盒（RP3301）成功解決了各種難提植物RNA的問題后，新近又針對(duì)高通量植物DNA的提取擴(kuò)增推出了最新產(chǎn)品——植物直接PCR試劑盒（PR7501），該試劑盒不需要液氮和研磨杵研磨，也不需要鋼珠破碎，更不借助任何特殊的儀器設(shè)備，方法及其方便快捷。只需截取0.5-0.7厘米的植物葉片放入溶液L中，95℃孵浴10分鐘，無需液氮研磨，然后加等體積溶液I，就可以直接進(jìn)行PCR，方便快捷，是植物領(lǐng)域的科研工作者的最佳選擇之一。植物直接PCR試劑盒的特點(diǎn)有：

Ø        在12 分鐘內(nèi)可以一步提取植物基因組DNA。

Ø        不需要酚/氯仿抽提。

Ø        不需要液氮對(duì)植物組織進(jìn)行冰凍、機(jī)械處理、純化或者DNA 的沉淀。

Ø        含PCR MIX,裂解后取4ul就可以直接PCR。

Ø        不需要上樣緩沖液和染料。

Ø        提取物在4℃可以保存6周。

 

實(shí)例1：

1、截取1-2片0.5-0.7厘米的水稻葉片放入1.5ml 離心管中，加入100μl溶液L，確保葉片浸沒在溶液中。

2、95℃孵育10 分鐘，此時(shí)DNA已釋放但葉片并沒有明顯的消化。

3、加入100μl溶液I。Vortex混合。直接PCR。

4、PCR反應(yīng)體系配制：

 

5、在PCR儀上進(jìn)行如下反應(yīng)：

94℃         3min

94℃      0.5-1min

50-65 C    0.5－1min   30-35個(gè)循環(huán)

72°C      0.5－2min

72°C      10 min

6、8%聚丙烯酰胺膠電泳，銀染。