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血清熱滅活的問題

瀏覽次數(shù):3757 發(fā)布日期:2010-8-25  來源:上海滬峰化工有限公司

血清的熱滅活是很多培養(yǎng)者感興趣的話題,價(jià)格不菲的血清中含有諸如生長因子,維生素,氨基酸等珍貴物質(zhì),而將它們置于50℃以上的溫度長達(dá)30分鐘是完全沒有必要的。盡管如此,在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室之中血清的熱滅活還是作為常規(guī)來執(zhí)行,多數(shù)實(shí)驗(yàn)者并沒有考慮熱處理對血清中的生長因子,氨基酸等成分帶來的負(fù)面影響,在我們的技術(shù)熱線中最常被提到的就是否該對血清進(jìn)行熱滅活,下面我們就對胎牛血清的熱滅活進(jìn)行一些探討和解釋。

熱滅活目的是為了去除血清中補(bǔ)體等對熱敏感的物質(zhì),但是在胎牛血清中對補(bǔ)體的滅活則明顯沒有必要。Triglia和Linscott[1]曾對商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測定,他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1,C6僅達(dá)成年動物血清的1-3%,而其它補(bǔ)體成分僅有成年動物的5-50%,至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補(bǔ)體固定實(shí)驗(yàn),我們也在多個(gè)不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結(jié)果。即使是在未稀釋的血清中,也未發(fā)現(xiàn)有明顯的溶血現(xiàn)象。另外,多數(shù)實(shí)驗(yàn)室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)熱的過程,也對熱敏的補(bǔ)體有滅活的作用。

根據(jù)調(diào)查,至少70%的研究者對血清的滅活僅僅是因?yàn)樽裾粘R?guī)操作,或者說認(rèn)為是理所當(dāng)然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時(shí)間則從15分鐘到60分鐘不等.其中最常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高,許多早先認(rèn)為是熱滅活的原因已經(jīng)不再成立,只有少數(shù)對血清進(jìn)行熱滅活的研究者在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)了這一步驟的有效性和必要性。

Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發(fā)育分化[2];有研究結(jié)果[3]證實(shí)熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細(xì)胞的促粘附作用,在用SV-BHK、BALB-3T3、CV-1、FS-4細(xì)胞對細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)中,熱滅活對胎牛血清的影響小于對小牛血清的影響。

我們調(diào)查了熱滅活對胎牛血清以及對其中不同細(xì)胞株生長能力的影響。通過比較11個(gè)不同細(xì)胞株,發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對6 個(gè)細(xì)胞株(HBAE,MDBK,Vero,成纖維細(xì)胞,MRC-5)的生長帶來負(fù)面影響,三個(gè)細(xì)胞株(FOX-NY,MDCK和CHO-K1)不受熱滅活的影響,而只有兩個(gè)細(xì)胞株(Balb/3T3,Sp2/0Ag14 hybrid),在熱滅活之后,細(xì)胞生長有輕微的改善。所以,在正常的操作下,熱滅活通常對細(xì)胞的生長沒有明顯的促進(jìn)作用。

在對補(bǔ)體滅活以外,熱處理同時(shí)也對血清中可能存在的支原體具有滅活作用。多年以前,450納米孔徑的濾膜被用于加工血清時(shí),血清中支原體的污染時(shí)有發(fā)生。針對這個(gè)問題,HyClone首家使用100納米三層濾膜連續(xù)濾過技術(shù),自從采用這項(xiàng)技術(shù)以及后來的40納米濾過技術(shù)之后,我們的血清產(chǎn)品中沒有再發(fā)現(xiàn)有支原體的污染,也是使得熱滅活成為不必要的另外一個(gè)原因。

在正常操作下,熱滅活經(jīng)常給血清產(chǎn)品帶來負(fù)面的影響,對血清的加熱經(jīng)常導(dǎo)致血清中沉淀的產(chǎn)生,而導(dǎo)致的沉淀又常常被認(rèn)為是微生物的污染。注意到這個(gè)現(xiàn)象之后,為了驗(yàn)證污染的存在,或者促進(jìn)沉淀的溶解,許多培養(yǎng)者往往將血清放置37℃溫育。這卻往往使情況變得更糟,血清中的蛋白進(jìn)一步的析出,為了確信血清未被污染,進(jìn)行的鏡檢,無菌培養(yǎng)試驗(yàn),和革蘭氏染色試驗(yàn)更是浪費(fèi)了實(shí)驗(yàn)者大量的時(shí)間和精力。

總之,多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中血清的熱滅活并不是必要的。很多場合下,熱滅活并不會改善細(xì)胞的生長,卻降低了支持細(xì)胞生長的能力。即使在少數(shù)有促進(jìn)的情況下,其促進(jìn)的比率也是微不足道的。另外,血清的熱滅活導(dǎo)致的沉淀常常被認(rèn)為是微生物的污染,從而給用戶和供應(yīng)商都帶來不必要的麻煩。我們建議,對于那些對血清進(jìn)行滅活的用戶,需要通過試驗(yàn)來證實(shí)其必要性,確定滅活的適當(dāng)條件;在滅活過程中,需要嚴(yán)格認(rèn)真監(jiān)測,并選擇一個(gè)可重復(fù)的方案進(jìn)行操作。

來源:上海滬峰生物科技有限公司
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