正�；�膜細胞原代培養(yǎng)

正�；�膜細胞原代培養(yǎng)

實驗材料：

1. 實驗動物：大鼠、兔，人手術切除的關節(jié)等；

2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素，pH7.2；

3. 培養(yǎng)液：RPMI1640培養(yǎng)基，補加15%小牛血清；

實驗方法：

1. 將大鼠處死后，用75%酒精消毒；

2. 用手術剪剖開其四肢皮膚與肌肉，暴露長骨兩端的關節(jié)，取出關節(jié)面滑膜組織置于盛有緩沖液的培養(yǎng)皿中；

3. 剔除滑膜組織外層結構及周邊軟骨組織，用緩沖液洗2—3次；

4. 將滑膜組織置于盛有少量小牛血清的培養(yǎng)皿中，剪碎成1mm×1mm×1mm大小的植塊；

5. 將制備的植塊接種到螺旋口培養(yǎng)瓶中。反轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使植有組織塊的一面朝上，加入培養(yǎng)液，蓋好瓶蓋。將培養(yǎng)瓶放入含5%CO2的培養(yǎng)箱中，在37℃條件下進行培養(yǎng)；

6. 培養(yǎng)4h后，組織塊較牢黏附于瓶底時，再輕輕反轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，繼續(xù)培養(yǎng)；

7. 培養(yǎng)3d后換培養(yǎng)液；