人可溶性腎素(前體)受體ELISA試劑盒

人可溶性腎素(前體)受體ELISA檢測試劑盒
日本IBL原裝進口，貨號：27782 

 簡介
腎素受體(RR)是腎素和腎素前體的共同受體.當(dāng)腎素與其受體結(jié)合后, 腎素作用于全身循環(huán)及局部組織中的血管緊張素,使其變成血管緊張素1,另外腎素受體受刺激后會激活細(xì)胞內(nèi)的信號通道.
公認(rèn)地對RR的研究對抑制過度活躍的腎素-血管緊縮素-醛固酮系統(tǒng)提供重要的研究方略.
(P)RR是一種分子量為39 kDa的單跨膜受體蛋白.據(jù)報道其中的29 kDa的可溶性片段是由于RR的裂解而產(chǎn)生的.因此定量的檢測血液或尿液中的可溶性(P)RR可以作為檢測發(fā)病新的輔助工具,作為解釋其病理機制的新途徑.
此ELSIA檢測試劑盒可以定量檢測人血液和尿液中的可溶性腎素(前體)受體。日本IBL中國獨家代理，人可溶性腎素(前體)受體ELISA試劑盒。 

此試劑盒基于酶免法的夾心原理，利用兩種高特異性抗體，TMB作為顯色劑，顯色的強度與人腎素受體的量成正比
  
125~8000pg/ml
日本IBL中國獨家代理，人可溶性腎素(前體)受體ELISA試劑盒。 日本IBL中國獨家代理，人可溶性腎素(前體)受體ELISA試劑盒。 
 
僅用于研究，不能用于診斷
此試劑盒可用于血清，EDTA-血漿，尿液和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中人腎素受體的定量檢測

1. 預(yù)包被板，抗人腎素受體兔IgG，親和純化            96孔
2. 標(biāo)記抗體濃縮液，

30X，HRP標(biāo)記抗人腎素受體（93A1B）小鼠IgGFab’   0.4mlx1

1. 標(biāo)準(zhǔn)品，重組人腎素受體                           0.5mlx2
2. EIA緩沖液，1%BSA，含0.05%吐溫20的PBS        30mlx1
3. 標(biāo)記抗體稀釋液，1%BSA，含0.05%吐溫20的PBS   12mlx1
4. 著色劑，TMB底物液                              15mlx1
5. 終止液，1N硫酸                                  12mlx1
6. 洗滌緩沖濃縮液,40X，含0.05%吐溫20的磷酸緩沖液   50mlx1 
7. 酶標(biāo)儀
8. 微移液管和槍頭
9. 燒杯
10. 去離子水
11. 冰箱（4℃）
12. 坐標(biāo)紙
13. 吸水紙
14. 用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的試管
15. 洗瓶
16. 一次性試驗管
    
17. 洗滌緩沖液制備：先將洗滌濃縮液平衡至室溫，充分混勻，然后吸取50ml濃縮液與1950ml的去離子水混勻，即得。配制的洗滌液應(yīng)保存于冰箱內(nèi)，并于2周內(nèi)用完
18. 標(biāo)記抗體的制備：用標(biāo)記抗體稀釋液將標(biāo)記抗體稀釋30倍，即得。

如：如果只測一條板，8孔，則需要標(biāo)記抗體800ul（30ul的標(biāo)記抗體+870ul的標(biāo)記抗體稀釋液，混勻，使用時每孔加100ul）
此步驟在實驗前完成
剩余的標(biāo)記抗體濃縮應(yīng)裝于密封瓶內(nèi)，保存在4℃

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的制備：吸取0.5ml的去離子水至標(biāo)準(zhǔn)品瓶內(nèi)，充分混勻，得到1600pg/ml的人腎素受體標(biāo)準(zhǔn)品
2. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：準(zhǔn)備8個試管用于標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋，每管加入230ul的EIA緩沖液

每管的濃度如下
1號管                 8000pg/ml
2號管                 4000 pg/ml
3號管                 2000 pg/ml
4號管                 1000 pg/ml
5號管                 500 pg/ml
6號管                 250 pg/ml
7號管                 125 pg/ml
8號管                 0ng/ml（試驗樣品空白）
吸取230ul的標(biāo)準(zhǔn)品于1號管混勻，然后從1號管吸取230ul加入2號管，依次連續(xù)稀釋，標(biāo)準(zhǔn)品范圍為8000~125 pg/ml

1. 樣品稀釋：樣品用EIA緩沖液稀釋。如果樣品濃度未知，建議稀釋幾個不同比例的樣品進行檢測，來確定樣品最佳稀釋比例
2. 使用前，所有樣品應(yīng)平衡至室溫，大約30min，然后充分混勻，確保試劑質(zhì)量無變化，標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品檢測同時進行
   

   試劑	檢測樣品	標(biāo)準(zhǔn)品	檢測樣品對照孔	試劑對照孔
   	檢測樣品100ul	稀釋標(biāo)準(zhǔn)品（1-7管）100ul	EIA緩沖液（第8管）100ul	EIA緩沖液100ul
   蓋板，4℃下孵育過夜
   洗板4次
   酶標(biāo)抗體	100ul	100ul	100ul	-
   蓋板，4℃下溫育60min
   洗板5次
   顯色劑	100ul	100ul	100ul	100ul
   室溫避光溫育30min
   終止液	100ul	100ul	100ul	100ul
   加終止液后,30min內(nèi)于酶標(biāo)儀450nm處讀取OD值

1. 確定試劑空白孔并加入100 μL  EIA緩沖液
2. 各加加100ul試驗樣品空白，樣品和稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品至相應(yīng)的孔內(nèi)
3. 蓋板，4℃下孵育過夜
4. 洗板，重復(fù)4次以上，吸水紙上拍干
5. 每孔加入100ul的標(biāo)記抗體液，除試劑空白孔外
6. 蓋板，4℃下孵育60min
7. 洗板5次，同步驟四
8. 吸取試驗所需的TMB底物液于一次性試管內(nèi)，每孔加入100ul的TMB底物液。剩余的TMB底物液不能再放回至原裝瓶內(nèi)
9. 黑暗處，室溫下孵育30min，溶液變藍(lán)
10. 每孔加入100ul的終止液，溶液變藍(lán)
11. 擦去微孔板底部的污點或水滴，終止液加入后30min內(nèi)，在酶標(biāo)儀450nm處讀數(shù)

1.  試驗樣品采集后應(yīng)立即檢測或是凍存，凍存的樣品避免反復(fù)凍融，檢測前應(yīng)在低溫下先將其完全溶解混勻
2. 試驗樣品用EIA緩沖液稀釋，
3. 試驗樣品和標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)做雙份檢測
4. 試驗樣品應(yīng)在中性PH范圍，有機溶劑的污染可能會影響檢測
5. 只能用試劑盒提供的洗滌液洗板，否則會導(dǎo)致試驗失敗
6. 吸水紙上拍干微孔板，不能擦拭
7. TMB底物液應(yīng)貯存于黑暗處，因其對光敏感，且避免接觸金屬
8. 加入終止液后30min內(nèi)必須酶標(biāo)儀讀數(shù) 

繪制曲線前，所有的數(shù)據(jù)都應(yīng)減去試驗樣品空白值，包括標(biāo)準(zhǔn)品和未知的樣品。以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值和濃度在對數(shù)-對數(shù)坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上可直接讀取未知樣品的濃度
 
附：采用全自動酶標(biāo)儀檢測，只需檢測前設(shè)置好酶標(biāo)儀的相關(guān)參數(shù)，如坐標(biāo)參數(shù)（線性，半對數(shù)）和計算方式參數(shù)（三次回歸、四參數(shù)或雙對數(shù)曲線方程），即可直接得到結(jié)果
 日本IBL中國獨家代理，人可溶性腎素(前體)受體ELISA試劑盒。 日本IBL中國獨家代理，人可溶性腎素(前體)受體ELISA試劑盒。
本譯文僅供參考，詳情請以原文為準(zhǔn)。 
 
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