幾種DNA提取方法的優(yōu)缺點比較

幾種DNA提取方法的優(yōu)缺點比較

文章來源：洛陽吉恩特生物科技有限公司

自然界中無論是植物、動物還是病毒，DNA作為大部分生物的遺傳物質(zhì)，在遺傳中起著不可替代的作用，為了研究生物的基因，就需要將DNA從細(xì)胞中提取出來，這個過程有很多方法可以實現(xiàn)，目前比較常用的有苯酚氯仿抽提法、離心柱法和磁珠法，吉恩特實驗室就這三種提取方法進行了梳理和比較，總結(jié)出各方法的優(yōu)缺點供廣大科研工作者參考。

1.苯酚氯仿抽提法

     苯酚氯仿提取DNA是利用酚是蛋白質(zhì)的變性劑，反復(fù)抽提，使蛋白質(zhì)變性，SDS(十二烷基磺酸鈉)將細(xì)胞膜裂解，在蛋白酶K、EDTA的存在下消化蛋白質(zhì)或多肽或小肽分子，變性降解核蛋白，使DNA從核蛋白中游離出來。而DNA易溶于水，卻不溶于有機溶劑。蛋白質(zhì)分子表面帶有親水基團，也容易進行水合作用，并在表面形成一層水化層，使蛋白質(zhì)分子能順利地進入到水溶液中形成穩(wěn)定的膠體溶液。當(dāng)有機溶液存在時，蛋白質(zhì)的這種膠體穩(wěn)定性遭到破壞，變性沉淀。離心后有機溶劑在試管底層(有機相)，DNA存在于上層水相中，蛋白質(zhì)則沉淀于兩相之間。利用萃取原理，根據(jù)蛋白核酸溶于不同的試劑層，將槍頭伸入不同液層內(nèi)抽取所需的成分，經(jīng)多次洗滌后獲得純化核酸。

      該方法的缺點是由于使用了苯酚、氯仿等試劑，毒性較大，長時間操作對人員健康有較大影響，而且核酸的回收率較低，損失量較大，由于操作體系大，不同實驗人員操作重復(fù)性差，不利于保護RNA，很難進行微量化的操作。  優(yōu)點是采用了實驗室常見的試劑和藥品，做起來成本比較低廉。

2.離心柱法

      離心柱法主要原理是將對核酸有吸附作用的官能基團固定在離心柱模上，通過加入不同的裂解試劑、洗滌試劑并反復(fù)離心，以達(dá)到核酸與雜質(zhì)分離的目的，獲得純化的核酸。離心柱法DNA提取它的優(yōu)點是比傳統(tǒng)的酚氯法提取的純度高，有利于RNA保護，而且能進行微量操作，以其低廉的價格和相對便捷的操作，漸逐取代了傳統(tǒng)DNA提取方法，被高�？蒲兴�等市場普遍接受。

      離心柱法DNA提取的缺點是需要較多的樣本，耗材多，對于珍稀樣本無能為力，特別是在法醫(yī)、考古等領(lǐng)域顯得力不從心。同時離心柱法DNA提取需要反復(fù)離心，不便于高通量、自動化操作，與現(xiàn)代生物學(xué)實驗的高通量、自動化要求格格不入，特別是在基因診斷、疾病檢測、轉(zhuǎn)基因檢測等領(lǐng)域，離心柱法DNA提取需要大量的操作人員及儀器設(shè)備。當(dāng)面對突發(fā)疫情時，更是需要有高通量的DNA提取設(shè)備與方法才能更有效準(zhǔn)確的監(jiān)測疫情、控制疫情。為此需要一種新的DNA提取方法解決這個實際難題。在這個時代潮流需求的驅(qū)動下，磁珠法DNA提取應(yīng)運而生。

3.磁珠法

      磁珠法的原理是在磁珠表面修飾有對核酸有吸附作用的特定活性官能基團，通過不同的裂解液結(jié)合液洗滌液在特定的條件下能夠與目的物質(zhì)進行特異性結(jié)合，同時利用磁珠自身的磁性，在外磁場的作用下可以方便的實現(xiàn)定向移動與富集，從而達(dá)到核酸與雜質(zhì)分離的目的，進而實現(xiàn)對目標(biāo)物質(zhì)的分離純化，獲得純化核酸。

       磁珠法是納米科技與生物技術(shù)的完美結(jié)合，具有其他DNA提取方法無法比擬的優(yōu)勢，主要體現(xiàn)在：

a.能夠?qū)崿F(xiàn)自動化、高通量操作，配合96孔的核酸自動提取儀，在以往做一個樣品的提取時間內(nèi)可同時實現(xiàn)對96個樣品的處理，效率直接提高96倍，滿足了當(dāng)前生物學(xué)高通量操作的要求，使得在大規(guī)模疫情爆發(fā)時能夠進行快速篩查原因，這個優(yōu)點是其他方法難以趕超的。

b.操作簡單、用時短，整個提取流程只有裂解、結(jié)合、洗滌、洗脫四步短時間內(nèi)即可完成。

c.安全無毒，不使用傳統(tǒng)方法中的苯、氯仿等有毒試劑，對實驗操作人員的傷害少，保護了實驗人員的身體健康。

d.磁珠與核酸的特異性結(jié)合使得提取的核酸純度高、濃度大。

 e.靈敏度高，適合法醫(yī)樣本等痕量DNA提取。

      隨著當(dāng)代生物學(xué)的高速發(fā)展及核酸提取儀的大量普及，為了滿足時代要求，吉恩特生物專業(yè)研制磁珠法DNA提取，并開發(fā)了多系列磁珠法DNA提取的系統(tǒng)化方案，為廣大科研工作者提高試驗效率，簡化試驗過程提供強有力的技術(shù)支持和產(chǎn)品保障，磁珠法DNA提取也將成為現(xiàn)代分子生物學(xué)的主流。

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