細胞分化軟骨細胞阿爾新藍（alcian blue）染色試劑盒使用說明

細胞分化軟骨細胞阿爾新藍（alcian blue）染色試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

YIJI細胞分化軟骨細胞阿爾新藍（alcian blue）染色試劑是一種旨在使用陽離子染料阿爾新藍，使軟骨組織上蛋白多糖聚糖染色，呈現(xiàn)深藍色，來分析固定處理的細胞樣本中軟骨生成狀況的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良傳統(tǒng)方法、成功實驗證明的。主要適用于動物細胞分化和軟骨生成的檢測。廣泛用于軟骨細胞或組織病理生理的研究。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

技術(shù)背景

間質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cell）分化產(chǎn)生脂肪細胞（adipocyte）、成骨細胞（osteoblast）、肌細胞（myocyte和軟骨細胞（chondrocyte）。軟骨細胞及其細胞外基質(zhì)（extracellular matrix）構(gòu)成軟骨組織（cartilage tissue），其含有硫酸軟骨素（chondroitin sulfate）和硫酸角質(zhì)素（karatan sulfate）等為主要成分的蛋白多糖（proteoglycan）聚糖（aggrecan），成為軟骨生成（chondrogenesis）的標記（indicator）。阿爾新藍（alcian blue）是一種陽離子含銅染料，使酸性粘多糖（mucopolysaccharide）類蛋白聚糖染色，呈現(xiàn)深藍色。 

產(chǎn)品內(nèi)容

YIJI清理液（Reagent A）  毫升

YIJI固著液（Reagent B）  毫升

YIJI染色液（Reagent C）  毫升

YIJI去色液（Reagent D）  毫升

產(chǎn)品說明書  1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；YIJI染色液（Reagent C），避免光照；YIJI去色液（Reagent D）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證6月

用戶自備

核固紅復染試劑盒（YIJI40011）：用于常規(guī)染色后復染

小型染色缸：用于細胞染色操作

光學顯微鏡：用于細胞染色后觀察分析

實驗步驟

操作一：細胞載玻片染色

• 樣本固著處理
• 取出待測的細胞載玻片 
• 小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent A）在載玻片上，鋪滿整個樣品表面
• 小心移去載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 小心加上xx微升YIJI固著液（Reagent B），鋪滿整個樣品表面
• 室溫下，孵育60分鐘
• 小心移去載玻片上的YIJI固著液（Reagent B）
• 小心加上xx微升YIJI清理液（Reagent A），清洗樣品表面
• 小心移去載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 重復實驗步驟7至8一次

二、樣本染色處理

• 小心加上xx微升YIJI染色液（Reagent C），鋪滿整個載玻片樣品表面
• 室溫下，孵育60分鐘，避免光照
• 小心移去載玻片上的YIJI染色液（Reagent C）
• 室溫下，小心將載玻片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
• 小心移去載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）

三、 （選擇步驟）樣本復染處理

• 小心加上xx微升YIJI去色液（Reagent D）在載玻片上，鋪滿整個載玻片樣品表面
• 室溫下孵育3分鐘（注意：觀察背景藍色變化，避免過度褪色）
• 小心移去載玻片上的YIJI去色液（Reagent D）
• 室溫下，小心將載玻片置入xx毫升YIJI清理液（Reagent A）中孵育2分鐘
• 小心移去載玻片上的YIJI清理液（Reagent A）
• 樣本復染處理（核固紅）
• 放上蓋玻片或封片
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：陽性細胞呈現(xiàn)深藍色，背景呈現(xiàn)淺藍色調(diào)（如果復染：細胞質(zhì)呈現(xiàn)粉紅色，細胞核呈現(xiàn)紅色）

操作二：24孔細胞培養(yǎng)板染色

一、樣本固著處理

1．小心抽去24孔細胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液

2．每孔加入xx微升YIJI清理液（Reagent A），清洗生長中的細胞表面

3．小心抽去每孔里的YIJI清理液（Reagent A）

4．每孔加入xx微升YIJI固定液（Reagent B），覆蓋整個生長表面

5．在室溫下孵育60分鐘

6．小心抽去YIJI固定液（Reagent B）

7．每孔加入xx微升YIJI清理液（Reagent A），清洗細胞表面

8．小心抽去YIJI清理液（Reagent A）

9．重復實驗步驟7至8兩次

二、樣本染色處理

• 小心加上xx微升YIJI染色液（Reagent C），覆蓋整個生長表面
• 室溫下，孵育60分鐘，避免光照
• 小心抽去YIJI染色液（Reagent C）
• 小心加入xx微升YIJI清理液（Reagent A）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去YIJI清理液（Reagent A）

三、 （選擇步驟）樣本復染處理

• 小心加上xx微升YIJI去色液（Reagent D），覆蓋整個生長表面
• 室溫下孵育3分鐘（注意：觀察背景藍色變化，避免過度褪色）
• 小心抽去YIJI去色液（Reagent D）
• 小心加入xx微升YIJI清理液（Reagent A）
• 室溫下孵育2分鐘
• 小心抽去YIJI清理液（Reagent A）
• 樣本復染處理（核固紅）
• 即刻在一般光學顯微鏡下觀察：性細胞呈現(xiàn)深藍色，背景呈現(xiàn)淺藍色調(diào)（如果復染：細胞質(zhì)呈現(xiàn)粉紅色，細胞核呈現(xiàn)紅色）

注意事項

• 本產(chǎn)品為50次操作
• 操作時，須帶手套
• YIJI去色液（Reagent D）具有腐蝕性，注意操作安全
• 所有操作在室溫下進行
• 試劑溶液在樣品表面時，避免有氣泡存在，同時確保鋪滿樣品表面
• 樣品去色避免過度
• 建議使用YIJI核固紅復染試劑盒（YIJI40011），增強染色對比度
• 細胞染色完成后，即刻進行光學顯微鏡觀察 
• 本公司提供系列軟骨組織細胞染色試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定顯色清晰