甘露糖醛酸寡糖對(duì)H2O2誘導(dǎo)衰老心肌細(xì)胞的影響

甘露糖醛酸寡糖是褐藻寡糖的一種，由褐藻膠加工而成，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤等多種生物學(xué)活性，有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)采用H2O2誘導(dǎo)建立心肌細(xì)胞衰老模型，探討甘露糖醛酸寡糖對(duì)衰老心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。
 

試驗(yàn)設(shè)5組：對(duì)照組（A組），H2O2組（B組），H2O2＋甘露糖醛酸寡糖（M3K）低劑量組（C組），H2O2組＋甘露糖醛酸寡糖（M3K）中劑量組（D組），H2O2＋甘露糖醛酸寡糖（M3K）高劑量組（E組）。當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)50%時(shí)，B組、C組、D組和E組細(xì)胞分別加入100μmol/L的H2O2誘導(dǎo)建立衰老模型，4小時(shí)后更換新鮮DMEM完全培養(yǎng)液。H2O2組繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)，甘露糖醛酸寡糖（M3K）干預(yù)各組分別加入10、50、100mg/L的甘露糖醛酸寡糖（M3K）培養(yǎng)48h。檢測(cè)各心肌細(xì)胞數(shù)量、各組心肌細(xì)胞P21和P53蛋白表達(dá)比較、各組細(xì)胞beclin1、Atg7和LC3-ⅡmRNA表達(dá)比較。結(jié)果，培養(yǎng)48小時(shí)后，B組（H2O2組）細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比明顯減少；甘露糖醛酸寡糖（M3K）干預(yù)各組細(xì)胞數(shù)量與H2O2組相比呈劑量依賴性增加，C組、D組、E組細(xì)胞數(shù)量分別比B組增加51.3%、82.2%、97.4%。與對(duì)照組相比，B組（H2O2組）心肌細(xì)胞P21和P53蛋白表達(dá)顯著增加；甘露糖醛酸寡糖（M3K）干預(yù)48小時(shí)后，各組心肌細(xì)胞P21和P53蛋白表達(dá)隨甘露糖醛酸寡糖（M3K）濃度的增加而降低，C組、D組、E組P21蛋白表達(dá)比分別比B組降低了20.0%、29.3%、40.3%；P53蛋白比分別比B組降低了30.2%、51.2%、62.2%。與對(duì)照組相比，H2O2組心肌細(xì)胞beclin1、Atg7和LC3-ⅡmRNA表達(dá)水平顯著降低；甘露糖醛酸寡糖（M3K）干預(yù)48小時(shí)后，各組心肌細(xì)胞beclin1、Atg7和LC3-ⅡmRNA表達(dá)呈濃度依賴性增加，C組、D組、E組beclin1表達(dá)分別比B組增加了35.9%、78.0%、132.6%；Atg7表達(dá)分別比B組增加了62.6%、96.4%、192.8%；LC3-ⅡmRNA表達(dá)分別比B組增加了18.7%、45.3%、90.4%。
 

試驗(yàn)結(jié)果表明，H2O2誘導(dǎo)了心肌細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激，引起細(xì)胞衰老，衰老后表現(xiàn)為細(xì)胞周期阻滯，增殖減少。甘露糖醛酸寡糖（M3K）干預(yù)衰老細(xì)胞48小時(shí)可使P21和P53蛋白表達(dá)下調(diào)，緩解衰老心肌細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯，增殖加快，進(jìn)而延緩心肌細(xì)胞衰老。甘露糖醛酸寡糖（M3K）處理后，細(xì)胞中的自噬相關(guān)基因beclin1、Atg7和LC3-ⅡmRNA表達(dá)增加，表明甘露糖醛酸寡糖（M3K）延緩心肌細(xì)胞衰老可能與自噬激活有關(guān)。