免疫學研究中常見的十大細胞實驗（下）

上一期，陳老師為大家介紹了活細胞分析在免疫學中的十大應用（其中前五個重點應用）；今天書接上文，我們一起來看看Incucyte®在免疫學研究中的另外五大應用：

1. 吞噬作用和細胞清除

2. 細胞增殖及計數(shù)

3. 細胞鑒定和免疫分型

4. 細胞激活和分

5. 細胞健康和凋亡

6. 免疫細胞殺傷（細胞溶解）

7. NETosis

8. 趨化作用

9. 病毒感染

10. 抗體內化
    
     

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吞噬作用和細胞清除

吞噬作用是一種特殊形式的細胞內吞作用，可將微生物病原體和外來的、垂死的細胞滅活并從體內清除。評估吞噬作用的常用方法通常為單點分析（例如高內涵分析），需要細胞分離（例如流式細胞術）或清洗/淬滅標記病原體（例如熒光素標記）。

Incucyte®則大大簡化了分析流程。使用pH值敏感染料（如pHrodo®）標記活細胞，使該標簽與細菌壁蛋白或目標細胞連接。當?shù)鞍谆蚰繕思毎�被吞噬并進入吞噬體的酸性環(huán)境時，可以測量染料熒光隨時間的增強。這種方法能夠區(qū)分吞噬作用和非特異性的細胞吸收或表面結合的非內化標簽，提高檢測準確性。
 

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NETosis

NETosis是一種獨特的細胞程序性死亡的形式，也是機體防御感染機制之一。當中性粒細胞遇到入侵的病原體時，它們會釋放出一種抗菌蛋白和染色質的混合物來捕獲和降解微生物。

Incucyte®可結合 Incucyte® Cytotox 綠色試劑實時自動定量分析執(zhí)行 NETosis 過程的中性粒細胞的膨脹和解聚階段，以及之后的 NET 釋放過程。實時數(shù)據(jù)分析也有助于確定補充生化分析的最佳時間點，如NETs中細胞外骨髓氧化酶（MPO）的存在（Gupta, et al., 2017）。此文章總結說，活細胞分析是 "評估中性粒細胞生理學和NETosis、以及迅速開發(fā)和測試新的中性粒細胞靶標的有力工具"。
 

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趨化作用

趨化作用是細胞在化學刺激下的定向運動，是免疫反應的一個重要組成部分。中性粒細胞、單核細胞、T細胞、巨噬細胞和小膠質細胞都會以這種方式被吸引到病原體和炎癥刺激物上。Incucyte® Clearview 96孔趨化板每個孔中都有精確的激光鉆孔供細胞移動通過。與傳統(tǒng)的Boyden Chamber實驗不同的是，當細胞向化學試劑移動時，可以對其進行可視化，量化動力學，能夠更深入地洞察細胞隨時間的全部生理特征和形態(tài)變化。另一個好處是，僅需傳統(tǒng)方法1/5~1/10的細胞數(shù)量，且重復性更好。
 

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病毒感染 

在體外測量病毒在哺乳動物細胞中的感染性和復制能力對于我們了解病毒感染疾病、篩選新的抗病毒藥物和疫苗以及免疫細胞佐劑至關重要。與傳統(tǒng)的蝕斑實驗和病灶形成實驗相比，Incucyte®可以通過計算被熒光蛋白（如GFP）標記的病毒的細胞數(shù)量和程度來自動量化病毒的傳播和復制能力，同時還可以評估病毒滴度。此外，HD圖像和實時拍攝還提供了病毒侵染后的細胞凋亡或壞死等相關數(shù)據(jù)。

Incucyte®活細胞分析工作流程的一個有趣的優(yōu)點是，當添加病毒或病毒復制體到細胞后，培養(yǎng)板不需要離開培養(yǎng)箱。因此，即使是高度傳染性的病毒也可以在適當?shù)纳�物隔離設施中安全地進行分析，而不會使操作者暴露在潛在的危險中。
 

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抗體內化

單克隆抗體（mAb）和抗體偶聯(lián)藥物（ADCs）被廣泛用于靶向免疫細胞，特別是在腫瘤免疫學和自身免疫性疾病中。這些生物制劑的一個關鍵特性是內化到不同細胞中的程度和速度決定了它們的療效、安全性和藥效曲線。

傳統(tǒng)方法先對每種抗體進行費時費力的標記，過程中需要洗滌步驟，且只能進行單一時間點的分析。整個操作過程繁雜、細胞易損失、數(shù)據(jù)遺漏。因此，在整個抗體篩選和功能表征過程中，迫切需要一種高效簡便的方法，在活細胞狀態(tài)下進行實時分析快速地定量抗體內化水平。

Incucyte®可以直接在96孔板中檢測Ab內化。使用對pH值敏感的熒光染料（Incucyte® Fabfluor-pH）直接與Ab的Fc段結合，即可檢測Ab進入細胞內隨酸性條件的增強，熒光信號增反映其內化的過程。只需一步添加染料，無需洗滌，即可實現(xiàn)抗體內化的快速、動力學、高通量分析。同一表面蛋白的不同Abs具有不同的內化特征，通過實時活細胞分析可在生物藥篩選和優(yōu)化的關鍵步驟中，準確且高效地比較不同的抗體候選藥物及生產(chǎn)批次的內化率。

說一千，道一萬。實時、活的、動態(tài)過程，高通量，這就是Incucyte®！

陳老濕彷佛看到了Octet®的身影~分子水平+細胞水平，神仙組合~