病理組織取材及固定

 病理技術(shù)是病理工作中的重要組成部分，它貫穿從接收樣本到發(fā)放病理報(bào)告整個(gè)診斷流程的始終。病理技術(shù)工作的質(zhì)量直接影響到后期的病理分析,因此高質(zhì)量的病理技術(shù)工作就顯得尤為重要。其中的關(guān)鍵是組織的處理，組織處理的好壞，直接決定了之后無(wú)論是常規(guī)HE染色還是免疫組化、原位雜交還是基因檢測(cè)的可靠性和準(zhǔn)確性。因此組織的固定顯得及其重要，良好的固定是制作一張優(yōu)良病理切片的先決條件，組織固定的好壞在制片操作中無(wú)法糾正，固定是組織處理最重要的一步。為什么要固定呢？固定是在組織離體后，用各種辦法使其細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)盡可能的接近其生活狀態(tài)時(shí)的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位置的過(guò)程。

一

組織固定的目的

1. 迅速防止組織、細(xì)胞的死后變化，防止組織自溶和腐敗，以保持組織和細(xì)胞與正常生活時(shí)的形態(tài)相似；

2. 細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等各種成分轉(zhuǎn)變成不溶性物質(zhì)，以保持它原有的結(jié)構(gòu)與生活時(shí)相仿；

3. 使組織中的各種物質(zhì)沉淀和凝固起來(lái)而產(chǎn)生不同的折射率，造成光學(xué)上的差異，以便染色后易于鑒別和觀察；

4. 固定劑兼有硬化作用，使組織硬化，增加組織硬度，便于制片；

5. 防止細(xì)胞過(guò)度收縮或膨脹而失去其原有形態(tài)結(jié)構(gòu)；

6. 經(jīng)過(guò)固定的組織，能對(duì)染料產(chǎn)生不同的親和力而著色清晰，便于辨認(rèn)。

二

病理取材基本要求

1．病理檢查應(yīng)分層次進(jìn)行，先進(jìn)行一般外觀觀察，后剖檢觀察，再進(jìn)行光鏡詳細(xì)檢查。

2．通常選擇正常與病變交界處組織，即包括病變本身及病變周圍組織。

3．對(duì)照組動(dòng)物相同器官取材時(shí)，選材部位應(yīng)盡量一致。

4．肉眼看不到明顯病變時(shí)，各實(shí)驗(yàn)組選取標(biāo)本位置應(yīng)一致。

5．所選組織應(yīng)包括臟器全部層次結(jié)構(gòu)或重要結(jié)構(gòu)，如腎應(yīng)包括皮質(zhì)、髓質(zhì)和腎盂。

6．胃腸標(biāo)本應(yīng)將內(nèi)容物沖洗掉，以免內(nèi)容物影響組織固定，產(chǎn)生自溶。

7．所取材料應(yīng)盡量保持肉眼標(biāo)本的完整性，不宜過(guò)厚或過(guò)薄，一般厚3-5mm，大小為1.5～2厘米。

8．切取組織時(shí)不要擠壓，使用鋒利刀具，少用剪刀，勿選用被器械鉗壓過(guò)的部位。

9．標(biāo)本取材要熟悉，盡可能快地完成整個(gè)過(guò)程，特別是易自溶的組織，如腸道、腦、腺體等。

三

組織固定的注意事項(xiàng)

1.固定必須及時(shí)。組織一經(jīng)離體后，必須立即固定(在30分鐘內(nèi))。

2.固定液的選擇。固定液的選擇非常重要，應(yīng)該根據(jù)制作要求選擇合適的固定液。最常用的固定液是4%多聚甲醛液或10%福爾馬林。

3.組織固定容器要選擇大一些的，固定液的量必須大于組織體積的5—10倍以上。

4.固定液的濃度。固定液的濃度必須準(zhǔn)確，過(guò)稀或過(guò)濃都會(huì)影響組織的形態(tài)和固定效果。

5.固定液的質(zhì)量：要注意固定液的有效期。發(fā)現(xiàn)固定液變質(zhì)，如甲醛液體產(chǎn)生白色沉淀,應(yīng)立即更換。

6.固定的溫度：過(guò)高，會(huì)加快組織的自溶和組織的過(guò)度收縮，并破壞細(xì)胞內(nèi)的抗原。

7.固定的時(shí)間：新鮮標(biāo)本應(yīng)該剖開(kāi)固定12—24小時(shí)后再取材。大標(biāo)本取材后在室溫下需再固定4—6小時(shí)。小標(biāo)本取材后應(yīng)該在室溫下再固定3—4小時(shí)；如果是新鮮小標(biāo)本取材,必須再固定4—8小時(shí)。如果室內(nèi)溫度過(guò)低,固定時(shí)間還需延長(zhǎng)。需要做免疫組化或分子病理的標(biāo)本，從標(biāo)本離體至組織脫水開(kāi)始,總固定時(shí)間一般不要超過(guò)48小時(shí),但也不要少于24小時(shí)(厚度2—3m)為佳。

       固定是病理制片過(guò)程中最重要的一步，因?yàn)檫@是不可逆的，也就是無(wú)法補(bǔ)救的。由于組織固定不佳，會(huì)造成組織腐爛、抗原丟失，將影響切片質(zhì)量，也將導(dǎo)致診斷困難或無(wú)法診斷，甚至影響免疫組化及基因檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性，因此規(guī)范、合理的標(biāo)本管理非常重要。