小鼠皮膚瘙癢模型的建立及抓癢行為學(xué)檢測(cè)方法

一.摘要
瘙癢是一種皮膚神經(jīng)官能癥疾患。臨床上將只有皮膚瘙癢而無(wú)原發(fā)性皮膚損害者稱(chēng)之為瘙癢癥。目前瘙癢的發(fā)病機(jī)制尚不確定，現(xiàn)有動(dòng)物模型多只是反映瘙癢的某些特點(diǎn)，以西醫(yī)指標(biāo)評(píng)判為主。 二.造模動(dòng)物
現(xiàn)用于制備瘙癢模型的動(dòng)物有主要有小鼠、大鼠、豚鼠和家兔等，以小鼠、豚鼠更為常用。常選用成年動(dòng)物，雌雄各半。
三.造模方法
1. 磷酸組胺誘發(fā)制備豚鼠瘙癢模型
1.1 原理 組胺受體是一類(lèi)G蛋白偶聯(lián)受體，通過(guò)激活瞬時(shí)感受器電位受體，繼而激活一系列的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)，從而導(dǎo)致瘙癢。
1.2 方法 清潔級(jí)豚鼠，體質(zhì)量250-280g，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)前48 h先將豚鼠右后足背剪毛，脫毛劑脫毛，面積約1cm2。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日再將脫毛處皮膚用細(xì)砂紙輕輕擦傷，使之發(fā)紅，以滲血但不出血為度。于創(chuàng)傷處涂抹0.05%的磷酸組胺30μL/只（或0.01%的磷酸組胺50μL/只），30min內(nèi)豚鼠如不出現(xiàn)瘙癢反應(yīng)（即舔右后足創(chuàng)傷部位的動(dòng)作），需再涂抹1次組胺，如此重復(fù)操作，直至出現(xiàn)為止。記錄涂抹組織胺的次數(shù)及累積用量。也可將磷酸組胺換成2%的5-羥色胺10μL，同上法制備豚鼠瘙癢模型。
2. 右旋糖酐誘發(fā)制備小鼠瘙癢模型
2.1 原理 右旋糖酐可誘導(dǎo)機(jī)體釋放內(nèi)源性組織胺，使小鼠產(chǎn)生皮膚瘙癢。
2.2 方法 SPF級(jí)昆明種小鼠，18-21g，雌雄各半。小鼠尾靜脈注射0.025%右旋糖酐0.05mL/10g（1.25mg/kg）。以小鼠前爪搔抓頭部、后爪搔抓軀干、嘴咬全身各部位作為瘙癢指征，模型成功。觀(guān)察記錄30min內(nèi)小鼠搔癢次數(shù)及搔癢持續(xù)時(shí)間。
3.氨基吡啶（4-AP）誘發(fā)制備小鼠瘙癢模型
3.1 原理 4-AP可促機(jī)體肥大細(xì)胞釋放組胺，導(dǎo)致小鼠發(fā)生瘙癢癥狀。
3.2 方法 小鼠模型：SPF級(jí)昆明種小鼠，18-21g，雌雄各半。選擇小鼠背尾部作為注射部位，給小鼠背尾部皮下注射0.02%的4-AP溶液，0.1mL/只。小鼠持續(xù)的舔體后出現(xiàn)停頓計(jì)數(shù)1次，記錄10min內(nèi)各小鼠舔體次數(shù)。
4. 組胺和4-AP聯(lián)用誘發(fā)制備小鼠瘙癢模型
4.1 原理 組胺受體是一類(lèi)G蛋白偶聯(lián)受體，組胺可興奮該受體導(dǎo)致瘙癢發(fā)生；4-AP是一種鉀通道阻滯劑，同時(shí)也具有促肥大細(xì)胞釋放組胺的作用。
4.2 方法 SPF級(jí)昆明種小鼠，體質(zhì)量18-21g，雌雄各半。小鼠提前1天用脫毛劑脫去頭頸部耳后部分皮膚的毛備用。實(shí)驗(yàn)時(shí)，在脫毛部位皮下注射0.05%組胺和0.02%4-AP，每只注射
100μL，注射后立即置透明觀(guān)察箱中觀(guān)察30min，用數(shù)碼攝像機(jī)記錄。以小鼠后爪持續(xù)搔抓注射部位至停止記作1次搔抓（連續(xù)搔抓記作1次）。觀(guān)察搔抓潛伏期（注射結(jié)束至第1次搔抓開(kāi)始的時(shí)間）和30min內(nèi)搔抓總次數(shù)。 四. 瘙癢模型的行為學(xué)評(píng)價(jià)方法
早期，動(dòng)物瘙癢模型的評(píng)價(jià)手段還是以人眼觀(guān)察為主，通過(guò)錄像，然后人工掐秒表去核對(duì)抓撓次數(shù)和抓撓時(shí)間，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而且準(zhǔn)確率不高，為了解決這一痛點(diǎn)，VisuScratch抓撓行為分析軟件基于圖像識(shí)別利用AI智能算法，自動(dòng)檢測(cè)動(dòng)物的抓癢次數(shù)和抓癢時(shí)間，同時(shí)還可以監(jiān)測(cè)抓撓的強(qiáng)度，最重要的一點(diǎn)，該套小動(dòng)物抓癢行為學(xué)分析系統(tǒng)可以結(jié)合光遺傳或者鈣信號(hào)記錄系統(tǒng)等同步實(shí)驗(yàn)，實(shí)現(xiàn)了抓癢行為檢測(cè)的同時(shí)能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)神經(jīng)元的活動(dòng)情況。