焦慮性抑郁心理應激的幾種造模方法

心理應激是指機體在某種環(huán)境刺激（應激源）作用下引起的心理生理機能改變的過程，動物慢性應激能較真實的模擬出人類生活的應激情境，常用于研究人類心理生理應激反應以及模擬人類情緒類疾病的臨床發(fā)病特點。慢性束縛應激（Chronic restraint stress, CRS）、慢性情緒應激（Chronic emotional stress, CES）以及慢性不可預見性溫和應激（Chronic unpredictable mild stress, CUMS）是常見的慢性心理應激造模方法，常用于建立動物的焦慮樣、抑郁樣等情緒類疾病模型。大量文獻報道，CRS 和 CES能同時誘導大鼠的焦慮和抑郁樣行為，而CUMS 則主要用于建立大小鼠的抑郁模型。

本實驗采用 CRS（3h、6h）、CES為焦慮性抑郁大鼠的心理應激造模方法，以焦慮模型大鼠和抑郁模型大鼠為對照，并分別從14 d、21 d、28 d 三個時間點進行比較分析，通過檢測各心理應激模型大鼠的行為學和腦內神經遞質，優(yōu)選出一種最佳的焦慮性抑郁心理應激造模方法。

動物造模

• 焦慮模型

采用不確定性空瓶飲水應激焦慮模型，進行定時喂水訓練7 d。定時喂水訓練為每日 2 次，時間分別為 8:00--8:10 和18:00--18:10，此兩個時間段內給動物飲水，其他時間不再給水。7 d 后開始進行應激實驗，在上述兩個時間段內隨機選取一個作為空瓶應激時間點，給動物以空水瓶誘發(fā)其情緒應激，另一個時間段給動物飲水，此應激持續(xù) 14d。

• 抑郁模型

采用慢性不可預見性應激抑郁模型，給予動物持續(xù) 21d的慢性溫和不可預測性應激，刺激因素包括：4 ℃冰水浴或40 ℃溫水浴（4min），禁食或禁水24h，傾籠24 h，24 h光照或黑暗， 電擊足底（50 V，3 min），夾尾（1 min），每天給予1-2種應激，同種應激不連續(xù)出現，其中同種軀體應激一周一次，造模期間動物均孤籠飼養(yǎng)。

• 焦慮性抑郁模型

采用3種不同的焦慮性抑郁模型，均為心理應激方法。國內外文獻表明此 3種方法均能使動物產生焦慮和抑郁樣行為。
① 慢性束縛應激3h：將動物束縛于特制的束縛器上，每日上午束縛1次，每次3h。
② 慢性束縛應激6h：將動物束縛于特制的束縛器上，每天9:00--15:00進行束縛，共6h。
③ 慢性情緒應激：動物每籠4只，應激方法包括光照或黑暗24h，擁擠24h，孤養(yǎng)24h，每天下午3:00-6:00 禁食或禁水1h，電擊（20次，持續(xù)5s，10mA，間隔30s），傾籠24h，每天采用 1種應激，同種應激不連續(xù)出現。

動物行為學檢測

• 高架十字迷宮實驗

將大鼠放入迷宮的中央平臺處，使其頭部正對封閉臂，釋放后記錄以下指標：① 進入開放臂次數（OE）；② 進入封閉臂次數（CE）；③ 進入開放臂時間（OT）；④ 進入封閉臂時間（CT）。由上述指標計算出：① 進入開放臂的比例（OE%）：OE/( OE +CE)×100%；② 開放臂停留時間比例（OT%）：OT/( OT + CT)×100%。每只大鼠測試5min。

• 曠場測試

將大鼠放入到一個長寬高分別為80 cm、80 cm、40 cm 的黑色敞箱中，敞箱底面平均劃分為 25 個小方格。實驗前 30 min 將待測大鼠放入測試房間，大鼠從敞箱中央放入，觀察記錄大鼠4 min內水平運動格數以及垂直豎立次數，計算水平和垂直得分的總和。

• 場景恐懼測試

于測試前1 d 對大鼠進行訓練，大鼠在斯金納箱適應 2 min 后，給予 30 s 的噪音（5k Hz, 75 d B），在噪音結束最后 2 s 同時給予電擊（50 V），大鼠繼續(xù)呆在箱內 30 s，然后取出放回籠內，24 h 后進行測試，將大鼠放入斯金納箱，2 min 后給予 60 s 的噪音，記錄 60 s 內大鼠的不動（freezing）時間百分比。  

• 強迫游泳實驗

將大鼠放入高、直徑分別為50 cm、20 cm 的圓柱形水缸中，水深約 40 cm，水溫保持在（25 ± 2）℃。實驗開始后 1 min 為適應時間，適應結束后記錄 5 min內大鼠的不動時間（大鼠兩前爪停止游動，身體呈漂浮狀態(tài)記為不動）。

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