PBMC細(xì)胞凍存液使用方法及注意事項(xiàng)

細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。目前，細(xì)胞凍存最常用的技術(shù)是液氮冷凍保存法，利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長狀態(tài)，并保持細(xì)胞特性。通過冷凍方式保存細(xì)胞，可以在需要時(shí)進(jìn)行復(fù)蘇及繼續(xù)培養(yǎng)。

最佳的冷凍條件是盡可能地降低細(xì)胞內(nèi)的晶體形成，減少細(xì)胞內(nèi)水凝固所形成的高濃度溶質(zhì)對細(xì)胞造成的低溫?fù)p傷。除了我們知道的 緩慢冷凍，液氮低溫保存，快速復(fù)蘇外，凍存液的選擇也非常重要。

1    簡介

匯智和源無血清細(xì)胞凍存液，優(yōu)化了其配方組分，能夠更大程度的減少細(xì)胞在凍存、復(fù)蘇時(shí)的損傷。

本品不含血清，降低了DMSO的含量，屬于即用型細(xì)胞凍存液，無需配制，直接在細(xì)胞中加入適量的凍存液即可。對于PBMC細(xì)胞、干細(xì)胞或T淋巴細(xì)胞等細(xì)胞具有較好的保護(hù)能力，讓你輕松擁有高活率的細(xì)胞。

2    優(yōu)勢

成分：不含血清，降低了DMSO含量

高效：長期凍存后復(fù)蘇的細(xì)胞，仍然可以達(dá)到滿意的復(fù)蘇率

方便：即用型，無需額外配制

安全：無微生物污染風(fēng)險(xiǎn)，批次穩(wěn)定

3    凍存流程

1、凍存管、梯度凍存盒放進(jìn)4℃冰箱提前預(yù)冷；

2、將要進(jìn)行凍存的PBMC細(xì)胞、干細(xì)胞或T淋巴細(xì)胞等細(xì)胞， 350g 離心 7 分鐘，棄去上清并收集細(xì)胞。

3、加入?yún)R智和源無血清細(xì)胞凍存液，吸管輕輕吹打，重懸細(xì)胞。計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度；

4、將細(xì)胞懸液分裝于無菌凍存管中，每管加1mL細(xì)胞懸液，旋好凍存管并仔細(xì)檢查，一定要蓋緊，做好標(biāo)記；

5、凍存：細(xì)胞放入梯度凍存盒，先在-20℃放1-2個(gè)小時(shí)，再放入 -80℃冰箱過夜，再轉(zhuǎn)入液氮罐。
4    細(xì)胞凍存的注意事項(xiàng)

1、緩慢冷凍，細(xì)胞逐步脫水，不會因產(chǎn)生大的冰晶而受到損害

2、細(xì)胞在-20C冰箱內(nèi)放置時(shí)間不可超過1小時(shí)，以防止冰晶過大而破壞細(xì)胞。

3、保存在-80°C冰箱中的時(shí)間不要超過24h，放入液氮中保存；

4、凍存管的蓋子一定要擰緊，否則復(fù)蘇水浴時(shí)會滲水，造成支原體污染；

5、定期檢查液氮儲備，保證細(xì)胞全部浸在液面下。

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