腦微透析探針在原兒茶醛體內(nèi)外回收率研究的應(yīng)用

微透析技術(shù)是一種新的生物樣品取樣技術(shù)，具有實(shí)時(shí)、活體、原位、樣品分析無需前處理等優(yōu)點(diǎn)。近年來多用于靶向分布和體內(nèi)代謝等方面的研究，尤其是治療腦部疾病的藥物研究，為評(píng)價(jià)藥物的血腦屏障穿透性及新型藥物的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)提供重要依據(jù)。

原兒茶醛是天麻、烏蕨及丹參等中藥的有效成分之一，可通過抗炎和神經(jīng)保護(hù)等作用機(jī)制來發(fā)揮抗大鼠腦缺血/再灌注損傷的藥理作用。本研究擬對(duì)原兒茶醛腦微透析探針的體內(nèi)外回收率進(jìn)行考察，以期為今后研究大鼠CIRI 模型的腦組織藥代動(dòng)力學(xué)特征提供參考。

1、動(dòng)物腦微透析導(dǎo)管植入手術(shù)探針預(yù)處理：將探針置于肝素鈉溶液中，提前用超純水以1.0μl/min 的流速灌流沖洗20 min，洗脫新探針半透膜上封膜的甘油。

2、導(dǎo)管植入術(shù)：正常大鼠6 只，大鼠吸入2% 異氟烷麻醉后，固定俯臥在腦立體定位儀上，剃除大鼠頭部被毛，剪開頭皮后用雙氧水去除肌肉組織充分暴露頭骨。按大鼠腦圖譜，以前囟作為定位基點(diǎn)，并根據(jù)坐標(biāo)（AP：+3.2 mm；ML：+0.4 mm；DV：3.0 mm）標(biāo)記右側(cè)大腦皮層區(qū)，將帶管心針的引導(dǎo)管綁在腦立體定位儀垂直臂上，定位準(zhǔn)確后用顱鉆鉆孔并刺破硬腦膜。同時(shí)以此點(diǎn)作為參照在周圍顱骨上繼續(xù)鉆2 個(gè)小孔，植入2 枚小螺釘，使3 孔連線成1個(gè)三角形保證套管穩(wěn)定。引導(dǎo)管浸于5% 肝素鈉溶液中，插入硬腦膜的腹側(cè)垂直定位點(diǎn)，用牙科水泥固定并縫合創(chuàng)口。

3、干預(yù)方法：正常大鼠頭部銜接微透析，采用取樣時(shí)的流速灌流平衡1 h，通過股靜脈注射原兒茶醛（100mg/kg），給藥體積為0.5 ml/100g。

4、原兒茶醛腦微探針體外回收率的測(cè)定

探針回收率可用正、反透析法來測(cè)定。其中正透析法可以說明探針的真實(shí)回收率，反透析法則可顯示體內(nèi)回收率與真實(shí)回收率的統(tǒng)一性。研究選擇正透析和反透析2 種實(shí)驗(yàn)方法來探究流速、濃度和探針穩(wěn)定性對(duì)大鼠腦微透析探針體內(nèi)外回收率的影響。

 

結(jié)果

1.流速對(duì)原兒茶醛體內(nèi)外回收率的影響體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，同一濃度的灌流液，原兒茶醛回收率隨著流速的增加而降低。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著流速的增加，原兒茶醛體內(nèi)回收率降低。在不同流速（1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 μl/min）下，體內(nèi)探針回收率略低于體外回收率。見圖1。
  2. 濃度對(duì)原兒茶醛體內(nèi)外回收率的影響體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在3.13~25 μg/ml 藥物濃度范圍內(nèi)，探針回收率基本無明顯變化，且回收率未呈現(xiàn)濃度依賴性，證實(shí)藥物濃度與探針的回收率無關(guān)，能夠應(yīng)用微透析法考察大鼠腦組織中原兒茶醛的實(shí)際濃度，見圖2 A。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，原兒茶醛濃度在3.133~25 μg/ml 內(nèi)對(duì)探針回收率影響極小，檢測(cè)到的回收率可校對(duì)不同濃度的透析液，得出大鼠腦組織中原兒茶醛的實(shí)際濃度，見圖2 B。在不同濃度范圍內(nèi)，體內(nèi)外探針回收率無明顯差異，見圖2 C。
 

3.原兒茶醛體內(nèi)外回收率穩(wěn)定性的考察體外實(shí)驗(yàn)顯示，設(shè)置流速為 1.5μl/min 時(shí)，探針的體外回收率PR=22.4%,RSD=6.54%;RR=19.5%,RSD=8.30%,證實(shí)探針在體外8 h 內(nèi)的回收率穩(wěn)定性較好。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，腦探針的體內(nèi)回收率=31.8%，RSD=6.19%，證明原兒茶醛體內(nèi)腦探針8 h內(nèi)回收率基本維持平穩(wěn)，具有良好的穩(wěn)定性。且體內(nèi)外探針回收率在8h內(nèi)基本保持一致。見圖3。

 

結(jié)果顯示，隨著灌流液流速提高，原兒茶醛腦微透析探針回收率逐漸降低，原兒茶醛質(zhì)量濃度不會(huì)影響腦微透析探針回收率，且8 h 內(nèi)原兒茶醛腦微透析探針回收率基本保持穩(wěn)定。微透析取樣時(shí)，流速越快，半透膜兩側(cè)物質(zhì)交換的效率越高，單位時(shí)間內(nèi)收集的樣品體積越多，但回收率越低；相反，流速越慢則回收率越高，但樣品體積會(huì)減少。

 

本研究表明正、反透析法測(cè)得的原兒茶醛大鼠腦探針體外回收率基本相同，并且體外和體內(nèi)透析法的相對(duì)回收率亦基本相同。本研究建立的原兒茶醛腦微透析方法，可為后期藥動(dòng)學(xué)及開發(fā)缺血性腦卒中的候選藥物研究提供實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)。

 

文獻(xiàn)來源：孫航，楊瓊英，寧瓏等.原兒茶醛腦微透析探針的體內(nèi)外回收率研究[R].上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào).2022.

 

-END-

 

想了解更多內(nèi)容，獲取相關(guān)咨詢請(qǐng)聯(lián)系 

電話 ： +86-0731-84428665    

聯(lián)系人：伍經(jīng)理 +86-180 7516 6076