HK-2細(xì)胞培養(yǎng)技巧

人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞系HK-2，取自正常成人腎臟的永生化近端小管上皮，通過(guò)轉(zhuǎn)入HPV-16 E6/E7基因構(gòu)建而成，并在無(wú)血清培養(yǎng)基中持續(xù)生長(zhǎng)了一年多。HK-2的生長(zhǎng)依賴于表皮生長(zhǎng)因子EGF，保留了良好的PTCs的表型。

陽(yáng)性表達(dá)：堿性磷酸酶；γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶；亮氨酸氨肽酶；酸性磷酸酶；細(xì)胞角蛋白;α3β1 整合素；纖連蛋白。

陰性表達(dá)：因子VIII 相關(guān)抗原、6.19 抗原和 CALLA 內(nèi)肽酶呈陰性。

在培養(yǎng)HK-2細(xì)胞的時(shí)候，常會(huì)出現(xiàn)一些細(xì)節(jié)問(wèn)題，不可掉以輕心。以下是小海星為大家準(zhǔn)備培養(yǎng)HK-2細(xì)胞常見(jiàn)的問(wèn)題，以及解決方案。
1. 出現(xiàn)拉絲
細(xì)胞伸出細(xì)長(zhǎng)的絲有兩種情況：
第一種情況是細(xì)胞遷移造成的，細(xì)胞在培養(yǎng)皿上并不是靜態(tài)的，也會(huì)出現(xiàn)遷移。遷移時(shí)細(xì)胞的一部分滯留在原處，遷移的過(guò)程中會(huì)拉出一條細(xì)長(zhǎng)的絲。這種情況下拉絲的細(xì)胞占少數(shù)，細(xì)胞整體的生長(zhǎng)狀態(tài)是正常的，不用特殊處理。

第二種情況是營(yíng)養(yǎng)不良，拉絲的細(xì)胞占大多數(shù)，同時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，此時(shí)可以提高血清比例（不超過(guò)20%）或添加5 ng/mL EGF。
2. 形態(tài)不對(duì)
正常的HK-2呈鋪路石狀生長(zhǎng)，如果細(xì)胞呈鐮刀狀或不規(guī)則狀（如下圖），可能是因?yàn)榕囵B(yǎng)環(huán)境發(fā)生了較大的改變，比如從有血清到無(wú)血清的轉(zhuǎn)換，此時(shí)換回原來(lái)的培養(yǎng)條件細(xì)胞可逐漸恢復(fù)；如果細(xì)胞變得細(xì)長(zhǎng)，這時(shí)候可能是營(yíng)養(yǎng)不良。
3. 出現(xiàn)空泡
空泡問(wèn)題需要結(jié)合生長(zhǎng)速度和形態(tài)來(lái)看：如果生長(zhǎng)速度和形態(tài)正常，空泡可能是正常的細(xì)胞活動(dòng)，傳代后空泡即可減輕。

如果生長(zhǎng)較慢，形態(tài)異常，空泡可能是自噬行為，可加大血清比例（不超過(guò)20%）或更換血清品牌改善細(xì)胞狀態(tài)。
4. 生長(zhǎng)緩慢
在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件（MEM+10%FBS+1%PS），以及1：3傳代條件下，HK-2的傳代周期約為3天。
當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，一周無(wú)法傳代時(shí)，需要考慮培養(yǎng)基特別是血清是否合適。選擇合適的培養(yǎng)基及血清，同時(shí)加大細(xì)胞接種密度可以改善。

培養(yǎng)基選擇：
HK-2最初建系使用無(wú)血清培養(yǎng)，眾多文獻(xiàn)以及實(shí)踐證明MEM、DMEM或DMEM/F12添加10%胎牛血清的條件下，HK-2也能良好生長(zhǎng)。但胎牛血清的質(zhì)量是關(guān)鍵，胎牛血清品質(zhì)越高，HK-2狀態(tài)越好。若使用無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，需要使用多聚賴氨酸或者明膠包被培養(yǎng)瓶，以促使貼壁。