表型穩(wěn)定的VEGF小鼠模型在眼科疾病藥效分析中的應(yīng)用

作為治療黃斑變性、腫瘤等疾病的熱門靶點，血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）已有多種藥物獲批臨床且進展喜人。今年2月份，研究人員在新生血管性年齡相關(guān)性黃斑變性的I期臨床研究中，完成了重組抗VEGFA和VEGFC雙特異性抗體融合蛋白的首例受試者給藥；腫瘤領(lǐng)域緊隨其后也有了新動向，PD-1/VEGF雙抗新藥AK112針對相關(guān)實體腫瘤的一系列臨床研究正在陸續(xù)展開，包括晚期消化道腫瘤的Ⅱ期臨床試驗。

VEGF包括VEGFA、VEGFB、VEGFC、VEGFD、VEGFE以及PLGF等類型，在當(dāng)前的眼科藥物研究中，VEGFA最為常見，是導(dǎo)致新生血管形成的主要刺激因子。上一期「眼科基因治療」專題我們提到了VEGFA相關(guān)的研究進展，以及臨床前動物模型的技術(shù)開發(fā)，今天就圍繞抗VEGF藥物研發(fā)相關(guān)內(nèi)容展開論述。

一、VEGF與眼科疾病的關(guān)聯(lián)
由于眼部VEGF與脈絡(luò)膜新生血管（choroidal neovascularization, CNV）的形成密切相關(guān)，因此被認(rèn)為是治療脈絡(luò)膜及視網(wǎng)膜新生血管具有極大潛力的靶點，目前廣泛應(yīng)用于濕性年齡相關(guān)性黃斑變性（wet age-related macular degeneration, wAMD）的研究及治療中。

抗VEGFA藥物可發(fā)揮抗新生血管、消除水腫等作用，極大改善了wAMD患者的預(yù)后，臨床上多采用玻璃體內(nèi)注射的方式進行wAMD治療�？梢哉f，以VEGF作為靶點的藥物為眼部新生血管疾病的治療開辟了新途徑。

二、抗VEGF藥物在眼科臨床的應(yīng)用
由于VEGF是CNV生成的關(guān)鍵介質(zhì)，因此，阻斷或中和VEGF表達(dá)的藥物便成為了近10年wAMD臨床治療的主要選擇，如阿柏西普（Aflibercept）、康柏西普（Conbercept）、貝伐珠單抗（Bevacizumab）和雷珠單抗（Ranibizumab）。

阿柏西普是一種可溶性VEGF誘餌型受體，較雷珠單抗等藥物相比，與VEGFA的所有亞型均具有更高的親和力。阿柏西普通過抑制VEGF的活性來防止新血管的生長，從而減少液體滲漏和視網(wǎng)膜組織的水腫，2011年獲批美國FDA用于治療滲出性年齡相關(guān)性黃斑變性。

作為新型抗VEGF藥物，阿柏西普具有半衰期長、給藥間隔短等優(yōu)點，但現(xiàn)有研究要遠(yuǎn)少于貝伐單抗、雷珠單抗等藥物，在臨床應(yīng)用方面有更大的探索空間。

利用自研的hVEGF小鼠，賽業(yè)生物進行了阿柏西普等陽性藥測試，評價靶向VEGF的抑制效果。FFA（熒光素眼底血管造影）結(jié)果顯示，相比PBS對照組，阿柏西普給藥后血管滲漏面積顯著減小。
 

賽業(yè)生物hVEGF小鼠的阿柏西普藥效測試

三、表型穩(wěn)定的VEGFA小鼠
這款自研的hVEGF小鼠，是賽業(yè)生物建立的牛視桿細(xì)胞特異性啟動子驅(qū)動人源VEGFA基因CDS序列表達(dá)的模型，以獲得能在視網(wǎng)膜特異性過表達(dá)人源VEGFA基因的轉(zhuǎn)基因小鼠。該小鼠可自然發(fā)病，在眼球結(jié)構(gòu)完整的基礎(chǔ)上出現(xiàn)明顯的血管病變，適用于新生血管性相關(guān)的眼科疾病的藥物評價及相關(guān)機制研究。
 

hVEGF小鼠的構(gòu)建方式

賽業(yè)生物眼科CRO平臺擁有一批眼科精細(xì)化操作技術(shù)人才及齊全的儀器設(shè)備，能熟練進行活體眼部檢測技術(shù)，針對VEGFA小鼠，可進行眼表觀察、眼壓測量、眼底照相、圖像引導(dǎo)OCT、全視野視網(wǎng)膜電圖ERG、眼底熒光造影FFA等項目；同時具備專業(yè)病理及分子檢測技術(shù)，包括視網(wǎng)膜VEGFA表達(dá)水平、FITC-Dextran 灌流視網(wǎng)膜鋪片、眼球組織切片VEGF表達(dá)水平等評價血管病變情況。部分表型數(shù)據(jù)如下：

1.HE染色顯示視網(wǎng)膜區(qū)域有血管增生。

HE染色結(jié)果

2.hVEGF小鼠過表達(dá)人源VEGFA，但是不影響本底鼠源VEGFA的表達(dá)。

眼球視網(wǎng)膜VEGF基因表達(dá)水平檢測

 
3.IB4染色結(jié)果顯示視網(wǎng)膜血管異常增生，且結(jié)構(gòu)紊亂，脈絡(luò)膜區(qū)域也有異常增生。
 

isolectin GS-lB4免疫染色

 
四、其他眼科模型推薦
除了以上提及的VEGFA小鼠模型，針對視網(wǎng)膜色素變性、先天性黑蒙、全色盲等疾病，賽業(yè)生物也開發(fā)了一系列基因編輯和人源化小鼠模型，同時可為研究人員提供個性化定制服務(wù)。