結(jié)腸癌原位移植小鼠模型的介紹與構(gòu)建案例分享

結(jié)腸癌是常見的發(fā)生于結(jié)腸部位的消化道惡性腫瘤，好發(fā)于直腸與乙狀結(jié)腸交界處，以40～50歲年齡組發(fā)病率最高，男女之比為2～3：1，其發(fā)病率占胃腸道腫瘤的第3位。結(jié)腸癌主要為腺癌、黏液腺癌、未分化癌，大體形態(tài)呈息肉狀、潰瘍型等。慢性結(jié)腸炎患者、結(jié)腸息肉患者、男性肥胖者等為易感人群。

結(jié)腸腫瘤癌細胞的原位移植動物模型在一定程度上可以模擬人體結(jié)腸癌的發(fā)生發(fā)展，為人類結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展、生物學特性以及治療藥物的研究提供了良好的平臺。

結(jié)腸癌原位移植模型介紹
與異位移植相比，結(jié)腸癌原位移植可以進一步反映腫瘤的真實情況，提高腫瘤模型的可靠性。在原位移植模型中可誘導轉(zhuǎn)移，表明腫瘤細胞和器官特異性因子可以相互作用，與結(jié)腸癌的發(fā)生存在關聯(lián)；原位移植還可以模擬腫瘤的免疫微環(huán)境。因此，大多數(shù)基于異位模型的結(jié)果都需要通過原位移植模型來進一步驗證。結(jié)腸癌原位生長可以更好地模擬腫瘤細胞在體內(nèi)生長的微環(huán)境，并且對藥物療效的預測更為準確。

賽業(yè)生物在免疫缺陷小鼠上成功移植的人源細胞系超200種，包括皮下、靜動脈或原位等接種部位，在原位移植方面，已有結(jié)腸癌、肺癌、肝癌等多癌種的成功案例。

結(jié)腸原位手術建模位點摸索
小鼠結(jié)腸壁菲薄、纖細，致使結(jié)腸壁原位注射手術難度較大。在人體解剖學概念中，血管、淋巴管和神經(jīng)進出腸壁的部位稱為系膜緣，此處腸壁與兩層腹膜圍成腸系膜三角。對應于人體解剖學概念中的"系膜緣"，在小鼠解剖學上稱為"腸系膜附著處"。但小鼠解剖學上沒有"系膜三角"的概念，小鼠盲腸系膜附著處的腸壁與兩層腹膜圍成的三角形區(qū)域定義為"盲腸系膜三角"，此處腸壁無漿膜覆蓋，有血管、淋巴管和神經(jīng)在此處進出。

通過手術暴露小鼠盲腸，將熒光標記的結(jié)腸癌細胞接種于盲腸系膜三角，建立小鼠結(jié)腸癌原位種植模型。

盲腸系膜三角內(nèi)組織疏松，注射后形成的水皰沿盲腸系膜附著處呈條帶狀分布，張力小，不易發(fā)生滲漏，腫瘤位于盲腸系膜一側(cè)，沿盲腸軸位分布，加之盲腸腸腔寬大，短期內(nèi)不易發(fā)生腸腔梗阻。盲腸系膜三角處的腸壁無漿膜覆蓋，接種的結(jié)腸癌細胞易于生長。盲腸系膜動、靜脈和淋巴管在盲腸系膜三角進出腸壁，血供豐富，血液回流于門靜脈系統(tǒng)，該部位腫瘤較易侵犯腸系膜血管和淋巴管，使結(jié)腸癌發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，尤其是肝轉(zhuǎn)移發(fā)生率高。

結(jié)腸癌模型的腫瘤組織在腹腔內(nèi)發(fā)生肝、脾、橫膈、腸系膜淋巴結(jié)等多處轉(zhuǎn)移，其轉(zhuǎn)移路徑符合人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移特點，能完全模擬結(jié)腸癌自然轉(zhuǎn)移發(fā)生過程。

結(jié)腸癌原位移植模型構(gòu)建案例
1.HCT116-luc細胞株

小鼠結(jié)腸癌細胞HCT116-luc結(jié)腸原位移植腫瘤活體熒光成像圖、熒光值變化圖和生存曲線圖

結(jié)果顯示HCT116-luc在C-NKG上容易成瘤，熒光信號值最高可達10¹⁰；小鼠最高生存期是27天，生存中位數(shù)是26天，生存周期較短，腫瘤組織在腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移，增殖一定時間（D25）后腫瘤組織內(nèi)部有鈣化，相應的小鼠熒光信號變?nèi)酢?/span>

2.HCT15-luc細胞株

小鼠結(jié)腸癌細胞HCT15-luc結(jié)腸原位移植腫瘤活體熒光成像圖、熒光值變化圖和生存曲線圖

結(jié)果顯示HCT15-luc在C-NKG上容易成瘤，熒光信號值最高可達10⁸。小鼠最高生存期是39天，生存中位數(shù)是35天，生存周期較短，腫瘤組織在腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移。

3.DLD-1-luc細胞株

小鼠結(jié)腸癌細胞DLD-1-luc結(jié)腸原位移植腫瘤活體熒光成像圖、熒光值變化圖和生存曲線圖

結(jié)果顯示DLD-1-luc在C-NKG上容易成瘤，熒光信號值最高可達10⁹。小鼠最高生存期是63天，生存中位數(shù)是59天，腫瘤組織在腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移。