微核試驗檢測方法—流式細胞術(shù)

微核（micronucleus,簡稱MCN），也叫衛(wèi)星核，是真核生物細胞在有絲分裂后期由于染色體片斷喪失著絲粒從而游離于細胞質(zhì)中的一種異常結(jié)構(gòu)，是染色體畸變的一種表現(xiàn)形式。微核是細胞有絲分裂后期染色體有規(guī)律地進入子細胞形成細胞核時，仍留在細胞質(zhì)中的整條染色單體或染色體的無著絲粒斷片或環(huán)。這些片段或染色體在分裂末期不能進入主核，在子細胞進入下一次分裂間期時，便濃縮成主核之外的小核，即微核。目前有輻射、化學(xué)誘變劑等較多理化因素可引起染色體斷裂，且均可導(dǎo)致細胞分裂從而產(chǎn)生微核現(xiàn)象。

一、 微核試驗的簡介

微核試驗是一種建立在細胞水平上分析DNA損傷的技術(shù)，其目的是以微核作為遺傳毒性檢測終點，用于檢測染色體斷裂劑及非整倍體誘導(dǎo)劑，是目前公認(rèn)的篩選致突變物的主要方法之一，在化合物遺傳毒性評價系統(tǒng)中占據(jù)著重要的地位。
陰性對照
陽性對照

微核試驗可分為體外微核及體內(nèi)微核試驗，體外微核試驗常以CHL、V79及CHO-K1細胞作為試驗系統(tǒng)，而體內(nèi)微核試驗使用較多的是嚙齒類動物的嗜多染紅細胞（PCE）或者網(wǎng)織紅細胞（RET)。PCE或RET是有絲分裂后期的紅細胞由幼年發(fā)展為成熟紅細胞過程中的一個階段，此時紅細胞的主核已排出，而微核仍保留在細胞質(zhì)中并十分易于辨認(rèn)。因此，嗜多染紅細胞或網(wǎng)織紅細胞是體內(nèi)微核試驗的首選細胞群。
二、 流式體內(nèi)微核檢測

除了人工閱片等常規(guī)檢測方法外，流式細胞術(shù)等自動化檢測方法也被用于微核檢測。流式細胞術(shù)(Flow cytometry)檢測方法是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的定量測定細胞和亞細胞成分的方法。該方法通過流式細胞儀以激光束為光源，將待測樣品進行熒光染色，然后在液體載體里將單個細胞通過激光束產(chǎn)生的熒光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘�，最終通過儀表顯示來達到定量測定的目的。

利用流式細胞術(shù)進行體內(nèi)微核鑒定則是由于與成熟的紅細胞相比，未成熟的網(wǎng)織紅細胞仍然含有RNA和某些表面蛋白質(zhì)（比如轉(zhuǎn)鐵蛋白受體，也稱為CD71），因此可用RNase降解RNA以排除RNA的干擾，且不同抗體可用于區(qū)分不同細胞或成分，如CD71抗體可區(qū)分網(wǎng)織紅細胞和成熟紅細胞，CD61抗體可用于排除血小板的干擾，而后可用PI染液對DNA進行染色，從而輕易鑒別出微核。流式體內(nèi)微核檢測流程如下：
三、相關(guān)產(chǎn)品

流式細胞術(shù)微核檢測具有檢測速度快、結(jié)果客觀可靠及可滿足高通量檢測要求等特點，因此，IPHASE作為體外研究生物試劑引領(lǐng)者，憑借先進的設(shè)備，專業(yè)的技術(shù)人員和多年研發(fā)的經(jīng)驗，現(xiàn)正在開發(fā)小鼠體內(nèi)微核試驗流式檢測試劑盒。小鼠染毒處理后，于不同時間點收集外周血，便可用該試劑盒進行流式微核檢測。試劑盒提供了用于小鼠外周血流式微核檢測的主要試劑，包括抗凝劑、RNase溶液、CD71、CD61熒光抗體、生物標(biāo)準(zhǔn)品及PI染液等，且試劑盒各組成成分均經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量檢測，實驗結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、重現(xiàn)性好。

與體內(nèi)微核檢測試驗一樣，體外微核檢測在預(yù)測致癌危險性、檢測非整倍體誘發(fā)劑及其它遺傳危害方面也具有重要的地位。IPHASE現(xiàn)已開發(fā)出了包括采用人工閱片方法的體外微核試驗試劑盒在內(nèi)的一系列專門用于體外遺傳毒性研究的產(chǎn)品，助力廣大客戶進行體外遺傳毒理學(xué)研究。
 

名稱	規(guī)格
體外微核試驗試劑盒	5mL*32 test
遺傳毒性Ames試劑盒	100/150/200/250 dishes
遺傳毒性Mini-Ames試劑盒	6孔板*24板/6孔板*40板
微量波動Ames試劑盒	16*96 wells/ 4*384 wells
UMU遺傳毒性試劑盒	96 wells
TK基因突變試劑盒	20ml*36 test
HGPRT基因突變試劑盒	20ml*36 test
體外染色體畸變試劑盒	5mL*30 test
彗星試驗試劑盒	20/50 test

IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經(jīng)驗，推出了多領(lǐng)域、多種類的高端科研試劑，為藥物早期研發(fā)提供篩選工具，為生命科學(xué)領(lǐng)域的探索提供新材料、新方法和新手段，為食品、藥品、化學(xué)品等的遺傳毒性研究提供便捷產(chǎn)品，望廣大科研工作者來電咨詢，咨詢熱線400-127-6686。