293T細(xì)胞聚團(tuán)或脫落怎么處理？

人胚腎細(xì)胞293T細(xì)胞是293 [HEK-293]細(xì)胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株，廣泛用于病毒包裝。其有多種衍生株，比如HEK293，293T/17等，來源都是人胚胎腎細(xì)胞，其極少表達(dá)細(xì)胞外配體所需的內(nèi)生受體，且比較容易轉(zhuǎn)染，是一個(gè)很常用的表達(dá)研究外源基因的細(xì)胞株。

人胚腎 293 (HEK 293) 細(xì)胞是生物技術(shù)和研究中常用的細(xì)胞系之一。由于 HEK 293 細(xì)胞具有較高的生長(zhǎng)效率，通常生成用于生物醫(yī)學(xué)和藥物研究的外源性蛋白質(zhì)。HEK 293細(xì)胞 也會(huì)被用于各種轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中。

細(xì)胞名稱：人胚腎細(xì)胞(STR鑒定正確)
細(xì)胞簡(jiǎn)稱：293T
細(xì)胞別名：Hek293T; HEK-293T; HEK 293T; HEK-293-T; HEK 293 T;  293-T; 293 T; 293T; Human Embryonic Kidney 293T; 293tsA1609neo
種屬來源：人
組織來源：胚腎
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
培養(yǎng)體系：DMEM-H+10%FBS+1%P/S
傳代比例：1:4-1:8，每2-3天換液一次
傳代周期：24-48 h
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO₂，溫度：37℃
凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲(chǔ)存
質(zhì)量檢測(cè)：細(xì)菌、真菌、支原體檢測(cè)均為陰性

293T細(xì)胞培養(yǎng)注意要點(diǎn)

1. 293T細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈上皮樣。293T細(xì)胞貼壁能力較弱，容易脫壁，操作應(yīng)該輕拿輕放。培養(yǎng)基及PBS均需預(yù)熱后使用。推薦復(fù)蘇或傳代時(shí)可使用提前用0.1%明膠包被過的培養(yǎng)瓶/皿，換液時(shí)，注意不要用力搖晃培養(yǎng)瓶/皿，培養(yǎng)基應(yīng)沿培養(yǎng)瓶/皿壁緩慢加入，避免直接對(duì)著細(xì)胞吹打。

2. 293T細(xì)胞消化時(shí)間較短，0.25%胰酶消化時(shí)間為60s-90s。

3. 293T細(xì)胞生長(zhǎng)速度很快，通常倍增時(shí)間不到24h，建議當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)匯合度達(dá)到70-90%時(shí)進(jìn)行傳代操作，避免過匯合，過匯合可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞聚團(tuán)。

該細(xì)胞因?yàn)橘N壁松散，若購買常溫細(xì)胞，收貨時(shí)有可能大部分細(xì)胞脫離培養(yǎng)瓶壁，顯微鏡下找不到細(xì)胞，只能看到肉眼可見的細(xì)胞團(tuán)，都是正�，F(xiàn)象。請(qǐng)參照以下方式處理：

1. 收到細(xì)胞后請(qǐng)先置于培養(yǎng)箱中穩(wěn)定2-4個(gè)小時(shí)后再進(jìn)行下一步處理，不建議放置培養(yǎng)箱過夜后處理。
2. 將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管，離心收集細(xì)胞（1100rpm，4min）。
3. 去掉上清，用PBS重懸細(xì)胞 (以手搖離心管的方式重懸，不要用移液槍吹)，將細(xì)胞收集到一個(gè)離心管中，再次離心(1200rpm, 3min)。
4. 去掉上清，加入1mL左右0.25%胰酶重懸細(xì)胞 (還是以手搖離心管的方式混勻，不要吹細(xì)胞), 放入培養(yǎng)箱消化2分鐘。

5. 消化2分鐘后，加入5mL含血清的培養(yǎng)基混勻終止消化，用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液，使細(xì)胞團(tuán)分散，離心 (1100rpm, 4min)。

6. 去掉上清，加入6mL左右的細(xì)胞相應(yīng)的完全培養(yǎng)基混勻，視細(xì)胞量決定是1:2傳代還是1:3傳代 (由于細(xì)胞運(yùn)輸有損傷，首次傳代建議比平時(shí)養(yǎng)密度稍高)。

7. 顯微鏡下觀察細(xì)胞是否有分散成單顆，若有明顯很大的細(xì)胞團(tuán)需要重復(fù)上述步驟二次消化3~5個(gè)細(xì)胞的小團(tuán)則不用干預(yù)，待細(xì)胞貼壁后再進(jìn)行消化分散即可。

8. 第二天及時(shí)觀察細(xì)胞貼壁情況，若貼壁細(xì)胞量過多細(xì)胞堆積，請(qǐng)于貼壁24小時(shí)后再次傳代分瓶，若密度正常則繼續(xù)生長(zhǎng)，不建議換液，貼壁48小時(shí)后換液去除不能貼壁的細(xì)胞。