人前列腺癌細胞(Lncap)培養(yǎng)注意要點

該細胞不形成均一的單層而是成簇生長，所以傳代的時候要反復吹打形成單個細胞；該細胞貼壁不牢，達不到匯合狀態(tài)，而且會使培養(yǎng)基迅速變酸；傳代后48h內(nèi)不要擾動，一定要保持培養(yǎng)瓶靜止。如果此時挪動培養(yǎng)瓶，會使大部分細胞從瓶底脫落。如果出現(xiàn)此種情況，需要重新孵育24~48h使細胞重新貼壁，細胞貼壁后可更換培養(yǎng)基。

細胞名稱：人前列腺癌細胞（STR鑒定正確）
細胞簡稱：Lncap
產(chǎn)品貨號：TCH-C238
種屬來源：人
組織來源：前列腺
疾病特征：前列腺癌
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
生長特性：貼壁生長
培養(yǎng)體系：RPMI-1640+10%FBS+1%P/S
傳代比例：1:2-1:3，每2-3天換液一次
傳代周期：72-96 h
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳，溫度：37℃
凍存條件：60%基礎培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲存
質(zhì)量檢測：細菌、真菌、支原體檢測均為陰性

Lncap細胞培養(yǎng)注意事項

1. 該細胞并不形成一致的單層，而是形成集落

2. 該細胞會使培養(yǎng)基快速變酸，且生長緩慢，故傳代后 48 小時內(nèi)不應擾動

3. 傳代后細胞貼壁較慢，48h 內(nèi)不要擾動

4. 細胞貼壁性不強，普通 TC 處理的培養(yǎng)瓶或皿不能使細胞很好的貼壁，培養(yǎng)難度較高。 建議使用 Corning 的 cellbind 細胞培養(yǎng)瓶，或者使用多聚-L-賴氨酸溶液對培養(yǎng)底面包被后進行細胞培養(yǎng)

5. 常溫運輸途中，多數(shù)細胞會從培養(yǎng)瓶底分離，懸浮在培養(yǎng)基中，請收集懸浮細胞離心 后重新接種。

6. 收貨后，如果發(fā)現(xiàn)細胞漂浮或成團，可按下面的步驟進行處理：

（1）將培養(yǎng)瓶內(nèi)的所有培養(yǎng)基，轉(zhuǎn)入無菌離心管，離心收集細胞（1200rpm 3min）；
（2）去掉上清，用PBS重懸細胞，將細胞收集到一個離心管中，PBS震動離心管混勻即可，再次離心（1200rpm 3min）；

（3）去掉上清，加入1ml左右0.25%胰酶，重懸混勻細胞。震動離心管，混勻即可，不能吹打。放入培養(yǎng)箱，消化細胞，消化時間3分鐘左右；

（4）消化完畢后，用移液槍輕輕吹打細胞懸液，使細胞團分散。加入5ml含血清的培養(yǎng)基，混勻后終止消化，離心（1200rpm 3min）；

（5）去掉上清，加入5-7ml相應完全培養(yǎng)基混勻，輕輕/反復吹打細胞，接種于無菌T25瓶中（接種容器應提前用對應培養(yǎng)基浸潤）。