冰凍切片的免疫組化染色步驟
速凍組織
將組織塊平放于軟塑料蓋或特制小盒內(nèi)(直徑2cm),如組織塊小可適量加OCT包埋劑浸沒組織,然后將特制小盒緩緩平放入盛有液氮的小杯內(nèi),當(dāng)盒底部接觸液氮時即開始?xì)饣序v,此時小盒保持原位切勿浸入液氮內(nèi),大約10-20秒組織即迅速冰凍成塊.取出組織冰塊立即置入-80℃冰箱儲存?zhèn)溆?或置于恒冷切片機(jī)冰凍切片.冰凍切片4~8mm,冰凍切片后如不染色,必須吹干,儲存低溫冰箱內(nèi),或進(jìn)行短暫預(yù)固定后儲存冰箱內(nèi)保存.室溫放置30分鐘后,入4℃丙酮固定10分鐘.也可根據(jù)需要選擇其它的固定方式.PBS洗,5分鐘×3.用3%過氧化氫孵育5~10分鐘,消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性.PBS洗,5分鐘×3.下接石蠟切片免疫組化染色操作步驟(滴加一抗開始).
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