Western Blotting實驗技術(shù)對外服務(wù)（傳統(tǒng)方法）
簡介：免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)，它是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的
免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現(xiàn)已成
為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進行定性和半定量分析。
主要實驗步驟如下：
1. 蛋白質(zhì)抽提 2. 蛋白質(zhì)定量 3. 變性聚丙烯酰胺不連續(xù)凝膠電泳(SDS-PAGE)
4. 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維膜或PVDF膜 5. 膜的封閉和抗體孵育 6. 結(jié)果檢測
7. 數(shù)據(jù)分析 8. 提供實驗報告
儀器與試劑：
1．儀器
高速組織搗碎機：SWISS KINEMATIC Ltd. Co（型號：PT1600E）
電泳儀：北京六一儀器廠（型號：DYY-8C）
電泳槽：北京六一儀器廠（型號：DYCZ-24D）
轉(zhuǎn)印槽：北京六一儀器廠（型號：DYCZ-40D）
低溫高速離心機：湖南湘儀公司（型號：H2050R）
超低溫冰箱：美國FORMA公司（型號：702）
分光光度計：上海分析儀器總廠（型號：721）
脫色搖床：上海琪特分析儀器有限公司（型號：STS-2）
操作流程：
1樣品準備
1）分別取大約200mg組織加入液氮碾磨成粉末狀，按每200mg組織加900μl上樣Buffer(無溴酚藍)和100ul 10mg/ml PMSF，混勻，玻璃勻漿器冰點勻漿
2）4℃，12000rpm離心10min
3）取上清夜-70℃凍存24hr
5）4℃12000rpm再次離心10min，取上清分裝，一份用于定蛋白，另一份加入溴酚藍(0.1%(W/V))后于100℃加熱4min，后于-20℃保存待用。
2定蛋白及計算電泳上樣量
根據(jù)總蛋白測定試劑盒說明書操作測定樣本中的總蛋白含量，電泳上樣量定為40ug
3電泳
1）安裝好電泳裝置
2）根據(jù)不同的指標配制相應(yīng)濃度的分離膠，灌膠約3/5體積，液封(<10%用0.1%SDS,>10%用異丙醇)
3）30min后，待凝后傾去封液
4）配5%的濃縮膠，灌膠至距平板頂部2mm處，插入梳子, 30min后，待凝后拔出梳子，用去離子水清洗加樣孔，用濾紙吸干
5）上樣：各樣品取50ug上樣，marker取10μl上樣(上樣前需按說明書進行預(yù)處理)
6）緩慢加入內(nèi)、外槽緩沖液，接通電源，90v電泳至指示劑進入分離膠后，調(diào)電壓至150V繼續(xù)電泳
7）當指示劑距平板底端1cm處時停止電泳
4 轉(zhuǎn)膜及檢測
1）準備2個Φ12cm的平面皿，一個裝去離子水浸泡NC膜20min，另一裝轉(zhuǎn)移緩沖液浸泡海綿和濾紙20min
2）取下膠，切除濃縮膠部分后，將分離膠浸入轉(zhuǎn)移緩沖液中約5min
3）按順序安裝好轉(zhuǎn)膜裝置（黑色板-海綿-三層濾紙-凝膠-硝酸纖維膜-三層濾紙-海綿-紅色板）
4）完全排除氣泡，4℃，100mA轉(zhuǎn)膜2hr。
5）傾去轉(zhuǎn)膜緩沖液，拆除轉(zhuǎn)膜裝置，將硝酸纖維膜放入麗春紅中搖床染色15min，用去離子水清洗至能看到條帶，后用鉛筆標出marker位置，再用去離子水震蕩以去除浮色。在右上角剪去一角以辨上下左右
6）將膜轉(zhuǎn)移至另一容器中，用5%脫脂奶粉封閉, 4℃過夜
7）將膜轉(zhuǎn)移至盡可能小的容器中并加入稀釋好的一抗
8）37℃搖床孵育約2hr
9）PBST洗滌4次，每次5min
10）將膜轉(zhuǎn)移至盡可能小的容器中并加入稀釋好的二抗，37℃搖床孵育約30min
11）PBST洗滌4次，每次5min
12）將膜轉(zhuǎn)移至盡可能小的容器中并加入BCIP/NBT底物，室溫孵育30min
13）取出NC膜，用蒸餾水漂洗后晾干
14）掃描及分析
服務(wù)要求：
- 樣本要求：組織樣品，每份樣本約250-500mg,新鮮或正確保存的組織。細胞樣本：每份樣本：1*10 6－1*10 7細胞數(shù)。
- 客戶提供有效的一抗，（國產(chǎn)抗體一般不接納） 一抗自備或代購。
- 客戶提供欲檢測目的蛋白的詳細背景資料。以及提供樣本的種屬，類型。
結(jié)果提供：
- 目的蛋白實驗圖片。
- 灰度分析結(jié)果。（免費分析）
- 內(nèi)參結(jié)果。（免費跑膠）
- 詳細的實驗步驟。
- 免費提供蛋白樣本保存液。
完成時間：
接受樣本后，1月以內(nèi)。
注意事項：
1、客戶要確保模型建造的成功性。
2、客戶要確�？贵w的有效性。
3、如要加快的客戶可以和我們聯(lián)系溝通。
4、收費標準：以每張膜8個樣本收費，不足8個樣本的按8個樣本收費）
【本平臺合作項目】
分子診斷、病理診斷、藥效學(xué)評價、毒理學(xué)實驗、細胞藥篩、動物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因編輯、病理檢測、基因芯片、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量測序、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識產(chǎn)權(quán)服務(wù)！
【全國免費熱線】：400-675-6758
【電話】 023-65316016,023-65316556
【郵箱】 china-western@163.com
【官網(wǎng)網(wǎng)址】www.cqwestern.com
【地址】 重慶高新區(qū)生物醫(yī)藥研發(fā)產(chǎn)業(yè)園D棟
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公司簡介
重慶威斯騰生物醫(yī)藥科技有限責(zé)任公司（簡稱“威斯騰生物”）是重慶高圣醫(yī)藥有限責(zé)任公司參與組建，放眼于全球生物醫(yī)藥前沿技術(shù)轉(zhuǎn)化應(yīng)用開發(fā)，立足于全國生物醫(yī)藥研發(fā)檢測合作及項目孵化、成果轉(zhuǎn)化，現(xiàn)在發(fā)展為一家集生物醫(yī)藥技術(shù)轉(zhuǎn)化、分子診斷產(chǎn)品開發(fā)及創(chuàng)新生物藥物開發(fā)的科技集團公司。威斯騰生物致力于重大疾病包括惡性腫瘤、重大傳染病等領(lǐng)域的早期篩查及快速檢測。公司總部設(shè)立于重慶高新區(qū)，同時在上海和北京設(shè)有管理團隊和運行機構(gòu)。
威斯騰生物擁有專家顧問團隊千人專家7人，長江學(xué)者2人，海外院士2人；現(xiàn)有固定研發(fā)人員100余人同時還擁有320人的海外科研顧問團隊。擁有完善的基礎(chǔ)實驗平臺、先進的實驗設(shè)備、專業(yè)的技術(shù)團隊、標準的操作流程、優(yōu)質(zhì)的合作平臺和強大的科學(xué)家網(wǎng)絡(luò)，可為國內(nèi)外研發(fā)機構(gòu)與藥企提供專業(yè)的生物研發(fā)檢測合作和科技成果轉(zhuǎn)化項目指導(dǎo)。七大基礎(chǔ)服務(wù)平臺包括：細胞生物學(xué)研究平臺、分子生物學(xué)研究平臺、病理學(xué)研究平臺、免疫學(xué)研究平臺、動物模型研究平臺、蛋白質(zhì)與多肽研究平臺、測序和芯片研究平臺。此外，公司擁有四大創(chuàng)新研發(fā)中心：分子診斷開發(fā)平臺,CRISPR/Cas9靶向基因修飾藥物開發(fā)平臺、納米靶向載藥創(chuàng)新平臺、創(chuàng)新藥物篩選平臺，除了進行公司的研發(fā)項目外，還可為從事相關(guān)研究的團隊和企業(yè)提供個性化服務(wù)。
威斯騰生物研發(fā)中心一直致力于高端分子診斷產(chǎn)品的創(chuàng)新研發(fā)，擁有國內(nèi)外處于領(lǐng)先地位的核心技術(shù)包括超微量核酸快速提取技術(shù)、快速熒光原位雜交（FISH）技術(shù)，CRISPR/Cas9基因定點編輯技術(shù)，熒光量子點材料開發(fā)和運用，醫(yī)學(xué)模式動物開發(fā)等。
重點研發(fā)領(lǐng)域包括肺癌、結(jié)直腸癌、乳腺癌等惡性腫瘤的快速早期診斷，目前已成功開發(fā)非小細胞肺癌快速FISH診斷試劑盒、乳腺癌快速FISH診斷試劑盒、超微量糞便核酸快速診斷結(jié)直腸癌試劑盒等產(chǎn)品，其中非小細胞肺癌快速FISH診斷試劑盒入選重慶市技術(shù)創(chuàng)新與應(yīng)用示范專項（產(chǎn)業(yè)類）重點研發(fā)項目名單，獲中國生物醫(yī)藥創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)項目最具投資價值TOP10評選賽北京站榮獲一等獎、第八屆中國創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)大賽生物醫(yī)藥行業(yè)組重慶賽區(qū)冠軍等。
同時，公司在重大傳染病的快速檢測及診斷上進行了研發(fā)布局，包括結(jié)核、EV71手足口病等重大傳染病的快速診斷，擁有項目包括超微量尿液核酸檢測結(jié)核試劑盒、量子點熒光標記傳染病快速檢測試劑盒等。新冠病毒疫情爆發(fā)后，威斯騰生物第一時間組建“新型冠狀病毒試劑盒緊急研究小組”及“新型冠狀病毒研發(fā)物資采購小組”，自籌經(jīng)費成功研發(fā)新型冠狀病毒（2019-nCoV）快速核酸檢測試劑盒（免核酸提取熒光PCR一步法）、新冠病毒糞便RNA核酸提取試劑盒。產(chǎn)品已提供給20家以上的疾控中心和公共衛(wèi)生中心使用，并與以上第三方疾控中心/公共衛(wèi)生中心建立起了長期穩(wěn)定的試用關(guān)系。
威斯騰生物是國家高新技術(shù)企業(yè)、科技型企業(yè)、市級新型研發(fā)機構(gòu)、專精特新企業(yè)、北京市海淀區(qū)生物醫(yī)藥與大健康協(xié)會副會長單位、重慶市醫(yī)藥行業(yè)協(xié)會副會長單位。下屬研發(fā)平臺被認定為“中關(guān)村生物醫(yī)藥共享平臺”、“中關(guān)村海淀區(qū)生物醫(yī)藥公共研發(fā)檢測平臺”、“重慶市生物醫(yī)藥檢測共享平臺”等。公司多次在全國性比賽中獲獎，2019年榮榮獲第八屆中國創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)大賽生物醫(yī)藥行業(yè)組重慶賽區(qū)冠軍。
同時，威斯騰生物積極參與國際技術(shù)轉(zhuǎn)移、成果轉(zhuǎn)化相關(guān)合作，與美國、澳大利亞、新加坡等相關(guān)高校、研究院所建立了深厚的聯(lián)系和多元化的合作，公司堅持以“技術(shù)創(chuàng)新、機制創(chuàng)新，文化創(chuàng)新，管理創(chuàng)新，戰(zhàn)略創(chuàng)新”的理念，為重大惡性腫瘤、傳染病疾病等領(lǐng)域的創(chuàng)新研發(fā)而不懈努力。
核心競爭力
- 熒光量子點材料開發(fā)和運用
- 快速熒光原位雜交（FISH）
- CRISPR/Cas9基因定點編輯技術(shù)
- 基因芯片診斷
- ChIP表觀遺傳研究
- 醫(yī)學(xué)模式動物開發(fā)
產(chǎn)業(yè)布局：
- 科技服務(wù)
- ctDNA,CTC液體活檢
- 病理醫(yī)學(xué)診斷
- PDX腫瘤篩查
- POCT產(chǎn)品開發(fā)
- IVD產(chǎn)品開發(fā)
- 分子醫(yī)學(xué)診斷
- 創(chuàng)新研發(fā)系統(tǒng)
行業(yè)交流
2015年12月 由中國醫(yī)藥企業(yè)發(fā)展促進會、中國醫(yī)藥科技成果轉(zhuǎn)化中心主辦，重慶市醫(yī)藥 產(chǎn)業(yè)發(fā)展辦公室指導(dǎo)，威斯騰生物醫(yī)藥承辦的“首屆2015·中國（重慶）生物醫(yī)藥前沿技術(shù)與產(chǎn)業(yè)化發(fā)展研討會”在重慶渝州賓館隆重舉行；
2016年4月 新加坡工程院院士、美國電子工程院連勇院士到威斯騰生物醫(yī)藥交流訪問；
2016年6月 美中藥協(xié)（SAPA）總會前會長、美國強生公司研發(fā)總監(jiān)、美國藥學(xué)家協(xié)會院士戴衛(wèi)國博士到威斯騰生物醫(yī)藥交流訪問；
2016年6月 威斯騰生物醫(yī)藥受邀參加第二屆藥學(xué)進展前沿高峰論壇；
2016年8月 威斯騰生物醫(yī)藥受邀參加2016北京生物醫(yī)藥科技成果展示暨項目推介會；
2016年10月 威斯騰生物醫(yī)藥受邀參加“科技部科技成果直通車暨首屆科技成果路演活動”；
2016年10月 威斯騰生物醫(yī)藥受邀參加2016中國（泰州）抗體藥物高峰論壇；
2016年11月 威斯騰生物醫(yī)藥受邀參加中國醫(yī)藥企業(yè)發(fā)展促進會第三次會員代表大會；
2016年11月 威斯騰生物醫(yī)藥成為諾獎醫(yī)學(xué)峰會投資委員會常務(wù)委員單位；
2016年12月 威斯騰生物醫(yī)藥受邀參加北京市海淀區(qū)生物與健康產(chǎn)業(yè)協(xié)會第一屆會員大會暨2016中關(guān)村核心區(qū)生物與健康產(chǎn)業(yè)發(fā)展高峰論壇；
2017年1月 威斯騰生物醫(yī)藥受邀參加首屆國際未來論壇；
2017年1月 威斯騰生物醫(yī)藥受邀參加第二屆中國天使兩會雙創(chuàng)年度盛典；
2017年3月 北京生物技術(shù)和新醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)促進中心潘悅主任一行到威斯騰生物醫(yī)藥交流訪 問；
2017年4月 威斯騰生物醫(yī)藥受邀參加四川省人民政府主辦的醫(yī)藥健康產(chǎn)業(yè)深度合作和創(chuàng)新發(fā)展座談會。
企業(yè)文化
公開透明的競爭文化機制
競爭文化的培養(yǎng)是企業(yè)文化著重培養(yǎng)的重要內(nèi)容，良好的競爭氛圍使每位員工不甘落后和停滯。采取正確的競爭策略，能夠極大地調(diào)動企業(yè)員工的積極性、創(chuàng)造性，煥發(fā)出競爭精神和創(chuàng)新精神，使人的潛能得到全面、充分地發(fā)揮，從而使整個企業(yè)的競爭能力得到全面地提高。
公開透明的競爭機制的建立，使每位員工看到并享有暢通的晉升通道，保證每位員工在威斯騰都能一展所長。
重視素質(zhì)培養(yǎng)和全面發(fā)展
威斯騰非常注重企業(yè)文化的建設(shè)，提倡“以人為本”的人才理念，關(guān)注員工的持續(xù)成長，倡導(dǎo)正能量，形成“勤奮，忠誠，熱情，向上”的企業(yè)文化。
素質(zhì)是人的品質(zhì)、能力、素養(yǎng)的總稱，企業(yè)員工的職業(yè)素質(zhì)是影響企業(yè)管理與發(fā)展的重要因素。高素質(zhì)的人才，不在于經(jīng)驗的長久，而在于長久的經(jīng)驗培育出來的能力。提升員工素質(zhì)是揭示各個方面及競爭力的利器。員工個人不僅可以參加企業(yè)組織的各種培訓(xùn)，還主動積極的進行自我學(xué)習(xí)與提高，不斷的修煉自我，提高自身的職業(yè)素質(zhì)，從而達到與時俱進，增強競爭力。
和諧“家”文化
公司提倡和諧“家”文化，致力于為員工提供良好的辦公環(huán)境、營造輕松舒適的辦公氛圍，公司在對員工關(guān)懷上下足了工夫，讓每一位企業(yè)員工真正感受企業(yè)文化的力量。”威斯騰管理委員會委員如是表示。一個好的公司，不能僅僅只注重品牌的打造，更要重視人才、重視技術(shù)、重視企業(yè)文化建設(shè)。這就是一個富有朝氣，活力的威斯騰生物！
