抗體制備: 合成多肽抗原

抗體制備：合成多肽抗原
 

目前抗體制備常采用多肽抗原及重組蛋白質(zhì)抗原，這兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，需結(jié)合實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行選擇。

重組蛋白質(zhì)抗原上往往帶有多個(gè)不同的抗原決定簇，其中有些是順序決定簇，有些為結(jié)構(gòu)決定簇。利用變性的抗原免疫動(dòng)物獲得多克隆抗體是針對(duì)各個(gè)抗原決定簇的抗體的混合物，在一般應(yīng)用中能夠用于檢測(cè)天然結(jié)構(gòu)或變性的目標(biāo)蛋白。利用變性蛋白做為免疫原的一個(gè)附帶的好處是變性蛋白往往有更強(qiáng)的免疫原性，能夠刺激動(dòng)物產(chǎn)生強(qiáng)的免疫應(yīng)答。

用做抗原目的的蛋白質(zhì)一般選擇使用大腸桿菌表達(dá)體系，因?yàn)樵擉w系時(shí)間與金錢成本最低。為了提高目標(biāo)蛋白質(zhì)表達(dá)的可能性與純化的方便性，人們有時(shí)只表達(dá)目標(biāo)蛋白的一個(gè)小的片段如特定的結(jié)構(gòu)域。大腸桿菌系統(tǒng)是欣百諾最早建立的成熟表達(dá)體系，有一系列設(shè)計(jì)完美的表達(dá)載體與非常成熟的表達(dá)培養(yǎng)條件，能夠在較短時(shí)間內(nèi)獲得基因表達(dá)產(chǎn)物，且所需的成本相對(duì)較低。

如果制備抗體的目的單純用于wb檢測(cè)，采用合成的小肽作為抗原是經(jīng)濟(jì)快速的，但是存在由于肽段選擇不合適造成的免疫原性弱或者無反應(yīng)原性的風(fēng)險(xiǎn)，由于抗體制備需要較長(zhǎng)的周期，因此利用多肽抗原制備抗體時(shí)，常常選取兩三段不同的肽段以保證實(shí)驗(yàn)的成功率。

·抗體制備（合成多肽抗原）——步驟 1. 多肽合成
免疫用的多肽抗原 純度要求大于80%，更高的純度雖然理論上可以獲得特異性更好的抗體，實(shí)際操作過程中動(dòng)物總是要產(chǎn)生大量非特異性抗體，從而掩蓋了抗原純度所帶來的收益。
客戶需要提供的材料：
委托我們合成時(shí)請(qǐng)?zhí)峁┠�的目�?biāo)多肽序列或蛋白質(zhì)序列，由我們與你討論決定具體采用的序列。
提供客戶：合成好的多肽，多肽高效液相圖譜
時(shí)間：2周

·抗體制備（合成多肽抗原）——步驟 2. KLH交聯(lián)
用小片段多肽制備抗體時(shí)必須交聯(lián)到適當(dāng)?shù)妮d體抗原上以增強(qiáng)其免疫原性。我們提供KLH與白蛋白兩種抗原載體。
客戶需要提供的材料：
若多肽由客戶提供，要求多肽量大于5毫克，N端或C端加入一個(gè)半胱氨酸，長(zhǎng)度在10-15氨基酸。
提供客戶：交聯(lián)好的蛋白或直接用于下一步免疫
時(shí)間：3個(gè)工作日

·抗體制備（合成多肽抗原）——步驟 3. 免疫動(dòng)物/采血
目前我們僅提供兔子的多抗制備，采用的動(dòng)物為SPF級(jí)新西蘭大白兔。每?jī)芍苊庖咭淮危�共免�?次。ELISA檢測(cè)，確保免疫后血清效價(jià)大于1:4000。
客戶需要提供的材料：
若客戶提供交聯(lián)好的蛋白，請(qǐng)與客服人員溝通其具體要求。
提供客戶：60-100ml免疫后血清，1ml免疫前血清對(duì)照，效價(jià)檢測(cè)結(jié)果
時(shí)間：10周左右

后繼抗體純化步驟，請(qǐng)參照抗血清Protein A/G親和抗原特異性親和純化服務(wù)說明。


·抗體制備訂購(gòu)信息：
郵箱：info@sinobio.net
電話：021-50798028
傳真：021-50798028-13