Solid 4二代測(cè)序

SOLiD 4測(cè)序系統(tǒng)(又稱5500 系列SOLiD測(cè)序系統(tǒng)）是由ABI公司研發(fā)的新一代超高通量基因測(cè)序分析系統(tǒng)，可運(yùn)用到多個(gè)領(lǐng)域。該系統(tǒng)采用結(jié)合在磁珠上單分子DNA片段簇為測(cè)序模板，以四色熒光標(biāo)記寡核苷酸進(jìn)行連續(xù)的連接反應(yīng)為基礎(chǔ)，對(duì)擴(kuò)增的DNA片段進(jìn)行大規(guī)模高通量測(cè)序。與聚合酶測(cè)序方法不同的是，SOLiD系統(tǒng)利用專利的逐步連接（stepwise ligation）技術(shù)來(lái)產(chǎn)生高質(zhì)量的數(shù)據(jù)，可應(yīng)用于全基因組測(cè)序、染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP）、微生物測(cè)序、數(shù)字核型分析、臨床測(cè)序、基因型分析、基因表達(dá)分析和小分子RNA的發(fā)現(xiàn)等等。

技術(shù)特點(diǎn)

1.無(wú)以倫比的通量：100Gb的數(shù)據(jù)/run；

2.高準(zhǔn)確率：準(zhǔn)確率>99.94%；

3.全自動(dòng)的操作平臺(tái)，省時(shí)，高效，準(zhǔn)確： 每道每天可產(chǎn)生100 M  reads，15Gb/每天；

4.系統(tǒng)的靈活性：兩個(gè)獨(dú)立控制的流動(dòng)池，可以進(jìn)行一張或二張玻片的同時(shí)分析。開(kāi)放式高密度磁珠沉置，每張玻片可分為1個(gè)，4個(gè)或8個(gè)測(cè)序區(qū)域，支持多重技術(shù)Barcode。

5.應(yīng)用廣泛靈活:超高通量的數(shù)據(jù)支持大規(guī)模測(cè)序和結(jié)構(gòu)變異性分析。獨(dú)特的雙堿基編碼特性使系統(tǒng)具備自檢功能，對(duì)單核苷酸多態(tài)性（SNP）的檢測(cè)精確率可以達(dá)到最高。以最大通量的標(biāo)簽實(shí)驗(yàn)為應(yīng)用的基礎(chǔ)，可以為全轉(zhuǎn)錄組、染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP）和小RNA，甲基化研究等提供高度敏感的檢測(cè)方法。

6.強(qiáng)大的生物信息軟件支持和技術(shù)支持

檢測(cè)原理

1.文庫(kù)制備（根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行）

*隨機(jī)片段文庫(kù)（fragment library）

*末端配對(duì)文庫(kù)（mate-paired library）

2.emPCR（乳滴PCR）/微珠富集在已加入模板，ＰＣＲ反應(yīng)元件，微珠和引物的微反應(yīng)器中進(jìn)行Clonal bead populations(克隆微珠群體）的制備。ＰＣＲ完成之后使模板變性，并進(jìn)行微珠富集以篩選帶有延伸模板的微珠。微珠上的模板經(jīng)過(guò)３‘端修飾，使之可以共價(jià)結(jié)合到玻片上。

3.微珠沉積

將３’末端修飾的微珠沉積在一塊玻片上。

4.通過(guò)連接反應(yīng)進(jìn)行測(cè)序

引物與文庫(kù)模板上的Ｐ１接頭序列雜交，一套四色熒光標(biāo)記的雙堿基探針競(jìng)相與測(cè)序引物連接。經(jīng)一系列循環(huán)的連接檢測(cè)和切割，測(cè)序反應(yīng)逐步進(jìn)行。

5.引物重置

每一核酸片段均與五輪引物重置完成一個(gè)序列標(biāo)簽。

應(yīng)用領(lǐng)域

１，ＤＮＡ測(cè)序

２，ＲＮＡ測(cè)序

ａ，轉(zhuǎn)錄本測(cè)序

ｂ，�。遥危翜y(cè)序

３，甲基化測(cè)序

ａ，重硫酸鹽處理測(cè)序

ｂ，ＭｅＤＩＰ測(cè)序