轉(zhuǎn)基因動物模型基因打靶技術(shù)服務

 

轉(zhuǎn)基因動物的方法，主要有4類：①融合法，包括精子融合法，微細胞介導融合等。②化學法，包括DNA—磷酸鈣沉淀法、DEAE—葡聚糖法、染色體介導法等。③物理法，包括顯微注射法、電脈沖法、細胞凍存法等。④病毒感染法，包括重組DNA病毒感染、重組RNA病毒感染等。但真正成熟并可以穩(wěn)定生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物的方法只有三種，即核顯微注射DNA法、精子介導法和核移植法等基因轉(zhuǎn)移方法。

 

體細胞核移植方法大體內(nèi)容：體細胞核移植是近年來新出現(xiàn)的一種轉(zhuǎn)基因技術(shù)。該方法是先把外源基因與供體細胞在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使外源基因整合到供體細胞上，然后將供體細胞細胞核移植到受體細胞——去核卵母細胞，構(gòu)成重建胚，再把其移植到假孕母體，待其妊娠、分娩，便可得到轉(zhuǎn)基因的克隆動物。

 

顯微注射法大體的技術(shù)服務流程包括以下四部分：

 

1.打靶載體設計與構(gòu)建：

項目起始后，根據(jù)客戶項目的具體情況和要求，百恩維生物的技術(shù)專家將在一周內(nèi)提供給客戶打靶載體設計方案，包括示意圖及具體的序列信息。經(jīng)客戶確認設計方案后，百恩維將開始構(gòu)建打靶載體。

 

2.打靶成功的ES細胞篩選：

   打靶載體經(jīng)測序驗證正確后，需線性化打靶載體，然后通過電轉(zhuǎn)化法導入ES細胞。通過載體上的正篩選和負篩選基因得到可能包含正確插入片段或替換片段的ES克隆。擴增這些ES克隆，提取基因組DNA。通過專門設計的引物用PCR方式鑒定ES克隆在基因組上的插入或置換位點是否正確。

 

3.由打靶ES細胞囊胚注射得到嵌合體動物：

擴增經(jīng)鑒定插入或置換片段位置正確的打靶ES克隆，以囊胚顯微注射的方式將一定數(shù)量的

4.打靶ES細胞注入動物囊胚中：

由嵌合體動物繁殖出生殖遺傳系基因打靶動物將嵌合體動物與適當品系的動物交配，后代出生后，通過PCR方式檢測動物是否含有打靶序列。如有，則該動物為具備生殖遺傳能力的基因打靶動物。

 

 

  

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