同位素相對(duì)標(biāo)記和絕對(duì)定量(iTRAQ)技術(shù)是一種新的、功能強(qiáng)大的可同時(shí)對(duì)四種樣品進(jìn)行絕對(duì)和相對(duì)定量研究的方法。作為一種新的蛋白質(zhì)絕對(duì)和相對(duì)定量技術(shù),具有很好的精確性和重復(fù)性,并且彌補(bǔ)了DIGE及ICAT的不足。它可以結(jié)合非凝膠串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù),對(duì)復(fù)雜樣本、細(xì)胞器、細(xì)胞裂解液等樣本進(jìn)行相對(duì)定量研究。
技術(shù)路線及方法:
該服務(wù)方案是從蛋白的提取到結(jié)果分析一整套全面解決方案,客戶(hù)只需要提供足夠的樣本就可以及時(shí)獲得科學(xué)結(jié)果。我們也可以針對(duì)客戶(hù)的實(shí)際情況量身定做方案,客戶(hù)也可以選取其中幾項(xiàng)服務(wù)。我們將竭誠(chéng)為客戶(hù)解決問(wèn)題。
首先您跟我們溝通您的實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),或者讓我們專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)?zāi)康膸椭O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。然后提供樣品(可以是組織,細(xì)胞或血液),我們?yōu)槟瓿伤械膶?shí)驗(yàn)操作,并提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告和數(shù)據(jù)分析報(bào)告。特別的,在項(xiàng)目結(jié)束后6個(gè)月的時(shí)間內(nèi)我們提供一次免費(fèi)報(bào)告修回和7×24h的問(wèn)題答疑服務(wù)。根據(jù)您的需要,我們?yōu)槟扑]最合適的實(shí)驗(yàn)方案。
蛋白質(zhì)組學(xué)平臺(tái):
蛋白質(zhì)組學(xué)平臺(tái) |
型號(hào) |
廠商 |
貨號(hào) |
iTRAQ |
Nano Aquity UPLC system+Q Exactive Mass spectrometer |
Waters +Thermo |
BT3000211 |
iTRAQ |
Triple TOF™5600 |
AB SCIEX |
BT3000212 |
AB Sciex Triple TOF™5600技術(shù)特點(diǎn):
1、同時(shí)具有三重四極桿的定量與TOF的精確質(zhì)量、結(jié)構(gòu)剖析能力;在定性時(shí)在速度和靈敏度之間取得平衡,在準(zhǔn)確定量時(shí)在重現(xiàn)性和精密度之間取得平衡。
2、加速飛行時(shí)間分析器(Accelerator TOFTMAnalyzer)--在高速度和工業(yè)級(jí)的靈敏度下具有高分辨能力。
3、簡(jiǎn)潔質(zhì)量校正EasyMASSTM Accuracy:不需要連續(xù)的重現(xiàn)校正,可在LC/MS條件下連續(xù)工作50個(gè)小時(shí),并達(dá)到<2 ppm(約1ppm)RMS的質(zhì)量準(zhǔn)確度。
4、智能高速SmartSpeedTM采集:在高速液相條件下可獲得高分辨率,在1秒內(nèi)可采集最多100張譜圖,或在1秒內(nèi)采集50張譜圖并同時(shí)進(jìn)行IDA采集(智能實(shí)時(shí)數(shù)據(jù)過(guò)濾)。
5、靈敏的高分辨率系統(tǒng):在高分辨系統(tǒng)中最低的定量(LOQ),定量性能相當(dāng)于高端三重四極桿。
AB Sciex Triple TOF™5600系統(tǒng)
Q Exactive高性能臺(tái)式四極桿—軌道阱LC-MS/MS系統(tǒng)
具有如下意義非凡的創(chuàng)新設(shè)計(jì),大大擴(kuò)展Thermo Scientific Exactive家族Orbitrap系統(tǒng)的功能:
1、新型離子源光學(xué)系統(tǒng)將靈敏度提高達(dá)五倍。
2、集成式四極桿質(zhì)量過(guò)濾器實(shí)現(xiàn)前體離子選擇性。在Orbitrap HR/AM檢測(cè)之前,MS/MS碎裂過(guò)程發(fā)生在能量更高的碰撞誘導(dǎo)解離(HCD)池中。
3、先進(jìn)的信號(hào)處理技術(shù)能夠在全掃描模式和最大掃描速度下將系統(tǒng)分辨率提高至140,000 FWHM。
4、新型C-Trap離子光學(xué)系統(tǒng)和HCD碰撞池提供了快速HCD MS/MS掃描并改善了低質(zhì)量數(shù)離子的傳遞,從而提高靈敏度和定量性能,尤其適用于使用同位素標(biāo)簽的實(shí)驗(yàn)。
5、多重檢測(cè)提高了整體系統(tǒng)工作周期的效率,能夠更好的與UHPLC兼容,并在Orbitrap進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)之前收集并保存多達(dá)10種母離子。
Thermo Scientific™ Q Exactive mass spectrometer
樣品要求:
1.體液
血清樣品量要求:500µl/例,一定避免反復(fù)凍融;
血液樣品量要求:5ml以上;
尿液樣品量要求:50ml以上;
其他體液(唾液,羊水,腦脊液等):5ml以上,保證不能溶血。
2.組織
動(dòng)物組織樣品量要求:濕重不少于100mg;
植物組織和菌體樣品量要求:濕重不少于2g。
3.細(xì)胞
樣品量要求:5*106。
4. 蛋白
樣品量要求:濃度不低于1mg/ml,蛋白量不少于500ug。
注意:如果送樣為溶液, 則溶液中一般不要有SDS、CHAPS、Triton X-100、NP40及吐溫 20、40等系列的去污劑。鹽濃度小于50mM。
其他種類(lèi)的樣品在收集之前請(qǐng)聯(lián)系公司銷(xiāo)售工程師。
數(shù)據(jù)分析內(nèi)容:
2.1 基本數(shù)據(jù)分析
Part01:數(shù)據(jù)預(yù)處理
Part02:差異蛋白篩選
Part03:層次聚類(lèi)分析
Part04:PCA分析
Part05:差異蛋白GO分類(lèi)
Part06:差異蛋白pathway分析
Part07:差異蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
2.2 高級(jí)數(shù)據(jù)分析
Part8:多組學(xué)數(shù)據(jù)關(guān)聯(lián)分析(具備多組學(xué)數(shù)據(jù))