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微生物基因組從頭測序
Roche 454 FLX+ System作為二代測序系統(tǒng)中讀長最長的測序系統(tǒng)(最長可達(dá)1000 bp),是進(jìn)行基因組de novo測序的最佳選擇
服務(wù)類別:測序/合成總訪問:1017
最后更新:2013-9-3半年訪問:12
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微生物基因組從頭測序
簡介:基因組從頭測序是指不需要任何現(xiàn)有的序列資料就可以對某個(gè)物種進(jìn)行測序,利用生物信息學(xué)分析手段對序列進(jìn)行拼接,組裝,從而獲得該物種的基因組圖譜。微生物生物多樣性豐富,基因組具有相對較小、重復(fù)序列較高、易于突變等特點(diǎn),因此很必要對微生物進(jìn)行全基因組測序。

 

一、技術(shù)路線

  

推薦平臺:Roche 454 FLX+ 數(shù)據(jù)為主導(dǎo),結(jié)合Illumina MiSeq和ABI 3730XL數(shù)據(jù)。

 

 

二、信息分析

1.原始數(shù)據(jù)整理、過濾及質(zhì)量評估

 

2.基因組序列拼裝與分析:

 基因組序列拼裝

 基因組拼裝效果評估 (contig N50、scaffold N50、genome size and GC% )

 缺口填補(bǔ)(gap finish) 

 比較基因組分析(基因組進(jìn)化樹分析、SNPs、共線性以及重復(fù)片段分析)

 繪制基因組圖譜

  

3.功能元件分析:

 蛋白編碼基因預(yù)測

 非編碼 RNA預(yù)測

 CRISPRs預(yù)測

 蛋白編碼基因的功能注釋

 蛋白編碼基因的KOG和 GO 注釋

 蛋白編碼基因的代謝途徑注釋(KEGG pathway)

  

4.根據(jù)客戶需求進(jìn)行個(gè)性化分析

 

 

三、送樣要求

1、 細(xì)菌:濃度≥200 ng/μl,總量≥50 μg;OD260/280值介于1.8-2.0之間的細(xì)菌基因組DNA,并確保電泳檢測無明顯RNA條帶,基因組條帶清晰、完整,主帶應(yīng)在100 kb以上,DNA無降解,無污染。 
  

2、 真菌:樣品濃度≥200 ng/μl,總量≥50 μg,OD值介于1.8-2.0之間的DNA,樣品濃度越高越好。真菌的De novo 測序獲得精細(xì)圖,若基因組大小介于10~45Mb之間,需提供至少100μg的DNA,若基因組大小大于45Mb,則需200 μg的DNA。
  

3、 樣品保存期間切忌反復(fù)凍融。

 

4、 送樣管務(wù)必標(biāo)清樣品編號,管口使用Parafilm 膜密封。

 

5、 提供DNA電泳檢測照片,用自封袋密封后隨樣品一起送樣。


 

四、派森諾優(yōu)勢

Roche 454 FLX+ System作為二代測序系統(tǒng)中讀長最長的測序系統(tǒng)(最長可達(dá)1000 bp),是進(jìn)行基因組de novo測序的最佳選擇。同時(shí)配合雙端測序試劑盒,進(jìn)行3 kb、8 kb和20 kb三種不同插入長度的雙端測序,使得在拼接中能夠跳過大范圍的重復(fù)區(qū),極大地優(yōu)化了全基因組de novo拼接的結(jié)果。再結(jié)合Illumina和ABI 3730測序平臺,將為您提供高質(zhì)量的微生物基因組de novo測序服務(wù)。

 

派森諾生物擁有多個(gè)先進(jìn)的測序平臺,經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員及成熟的數(shù)據(jù)處理和信息分析系統(tǒng),能夠根據(jù)合作伙伴的具體需求,設(shè)計(jì)最佳實(shí)驗(yàn)方案,第一時(shí)間提供專業(yè)、高效的全基因組de novo測序服務(wù)。

 

案例 

微生物基因組從頭測序

 

某細(xì)菌基因組

 

項(xiàng)目背景:基因組較大,GC含量高

 

研究目的:進(jìn)行全基因組測序,了解基因組的全貌

 

 

測序數(shù)據(jù)展示

 

 

 

 

 

 

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