Roche 454 FLX+ System作為二代測序系統(tǒng)中讀長最長的測序系統(tǒng)(最長可達(dá)1000 bp),是進(jìn)行基因組de novo測序的最佳選擇
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推薦平臺:Roche 454 FLX+ 數(shù)據(jù)為主導(dǎo),結(jié)合Illumina MiSeq和ABI 3730XL數(shù)據(jù)。
1.原始數(shù)據(jù)整理、過濾及質(zhì)量評估
2.基因組序列拼裝與分析:
基因組序列拼裝
基因組拼裝效果評估 (contig N50、scaffold N50、genome size and GC% )
缺口填補(bǔ)(gap finish)
比較基因組分析(基因組進(jìn)化樹分析、SNPs、共線性以及重復(fù)片段分析)
繪制基因組圖譜
蛋白編碼基因預(yù)測
非編碼 RNA預(yù)測
CRISPRs預(yù)測
蛋白編碼基因的功能注釋
蛋白編碼基因的KOG和 GO 注釋
蛋白編碼基因的代謝途徑注釋(KEGG pathway)
4.根據(jù)客戶需求進(jìn)行個(gè)性化分析
1、 細(xì)菌:濃度≥200 ng/μl,總量≥50 μg;OD260/280值介于1.8-2.0之間的細(xì)菌基因組DNA,并確保電泳檢測無明顯RNA條帶,基因組條帶清晰、完整,主帶應(yīng)在100 kb以上,DNA無降解,無污染。
2、 真菌:樣品濃度≥200 ng/μl,總量≥50 μg,OD值介于1.8-2.0之間的DNA,樣品濃度越高越好。真菌的De novo 測序獲得精細(xì)圖,若基因組大小介于10~45Mb之間,需提供至少100μg的DNA,若基因組大小大于45Mb,則需200 μg的DNA。
3、 樣品保存期間切忌反復(fù)凍融。
4、 送樣管務(wù)必標(biāo)清樣品編號,管口使用Parafilm 膜密封。
5、 提供DNA電泳檢測照片,用自封袋密封后隨樣品一起送樣。
Roche 454 FLX+ System作為二代測序系統(tǒng)中讀長最長的測序系統(tǒng)(最長可達(dá)1000 bp),是進(jìn)行基因組de novo測序的最佳選擇。同時(shí)配合雙端測序試劑盒,進(jìn)行3 kb、8 kb和20 kb三種不同插入長度的雙端測序,使得在拼接中能夠跳過大范圍的重復(fù)區(qū),極大地優(yōu)化了全基因組de novo拼接的結(jié)果。再結(jié)合Illumina和ABI 3730測序平臺,將為您提供高質(zhì)量的微生物基因組de novo測序服務(wù)。
派森諾生物擁有多個(gè)先進(jìn)的測序平臺,經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員及成熟的數(shù)據(jù)處理和信息分析系統(tǒng),能夠根據(jù)合作伙伴的具體需求,設(shè)計(jì)最佳實(shí)驗(yàn)方案,第一時(shí)間提供專業(yè)、高效的全基因組de novo測序服務(wù)。
案例
項(xiàng)目背景:基因組較大,GC含量高
研究目的:進(jìn)行全基因組測序,了解基因組的全貌