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Crispr-Cas9基因敲除小鼠
CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是一種廣泛存在于細(xì)菌與古細(xì)菌中的,由RNA介導(dǎo)的可遺傳的獲得性免疫系統(tǒng),這種免疫系統(tǒng)為宿主細(xì)胞提供了對(duì)外源DNA(如噬菌體質(zhì)粒)的免疫功能。
服務(wù)類別:轉(zhuǎn)基因總訪問:1573
最后更新:2015-8-27半年訪問:30
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基因敲除小鼠:       
       2013年1月份,美國(guó)兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室在《Science》雜志發(fā)表了基于Crispr-Cas9技術(shù)在細(xì)胞系中進(jìn)行基因敲除的新方法,一種全新的人工核酸內(nèi)切酶clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated(Cas)9出現(xiàn),它主要是基于細(xì)菌的一種獲得性免疫系統(tǒng)改造而成,其特點(diǎn)是制作簡(jiǎn)單,作用效果高。


技術(shù)原理:
       CRISPR/Cas9(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)是一種廣泛存在于細(xì)菌與古細(xì)菌中的,由RNA介導(dǎo)的可遺傳的獲得性免疫系統(tǒng),這種免疫系統(tǒng)為宿主細(xì)胞提供了對(duì)外源DNA(如噬菌體質(zhì)粒)的免疫功能。
       此系統(tǒng)的工作原理是CrRNA(CRISPR-derived RNA)通過堿基配對(duì)與tracrRNA (trans-activating RNA)結(jié)合形成tracrRNA/crRNA復(fù)合物,次復(fù)合物引導(dǎo)核酸酶Cas9蛋白在與CrRNA配對(duì)的序列靶位點(diǎn)剪切雙鏈DNA。而通過人工設(shè)計(jì)這兩種RNA,可以改造形成具有引導(dǎo)作用的SgRNA (short guide RNA),足以引導(dǎo)Cas9對(duì)DNA的定點(diǎn)切割。中喬新舟目前已經(jīng)成功將此技術(shù)應(yīng)用于大、小鼠基因KO/KI的模型制備,以及條件性敲除(Loxp系統(tǒng))模型的制備。

CRISPR/Cas9技術(shù)特點(diǎn):
       1、可實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因多個(gè)位點(diǎn)或多個(gè)基因同時(shí)敲除;
       2、可對(duì)基因進(jìn)行定點(diǎn)修飾(Tag、GFP、RFP、點(diǎn)突、條件性敲除);
       3、試驗(yàn)周期短、價(jià)格低、效率高;
       4、可應(yīng)用于大、小鼠等。

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