AFLP檢測(cè)服務(wù)

AFLP檢測(cè)服務(wù)
    AFLP是基于PCR技術(shù)擴(kuò)增基因組DNA限制性片段，基因組DNA先用限制性內(nèi)切酶切割，然后將雙鏈接頭連接到DNA片段的末端，接頭序列和相鄰的限制性位點(diǎn)序列，作為引物結(jié)合位點(diǎn)。限制性片段用二種酶切割產(chǎn)生，一種是罕見(jiàn)切割酶，一種是常用切割酶。它結(jié)合了RFLP和PCR技術(shù)特點(diǎn)，具有RFLP技術(shù)的可靠性和PCR技術(shù)的高效性。由于AFLP擴(kuò)增可使某一品種出現(xiàn)特定的DNA譜帶，而在另一品種中可能無(wú)此譜帶產(chǎn)生，因此，這種通過(guò)引物誘導(dǎo)及DNA擴(kuò)增后得到的DNA多態(tài)性可做為一種分子標(biāo)記。

操作流程
    AFLP反應(yīng)程序主要包括模板DNA制備，酶切片段擴(kuò)增及凝膠電泳分析這3個(gè)基本步驟。各步驟具體的過(guò)程有：
    1.首先要制備高分子量(HMW)基因組DNA，選擇6個(gè)堿基識(shí)別位點(diǎn)的限制性內(nèi)切酶(通常是EcoRI或PstI或SacI)。
    2.酶切后的限制性片段在T4連接酶的作用下與特定的接頭相連接，形成帶有接頭的特異性片段。
    3.DNA片段的預(yù)擴(kuò)增。
    4.在Taq聚合酶的作用下，完成AFLP的選擇性擴(kuò)增。
    5.帶熒光標(biāo)記的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序儀上機(jī)檢測(cè)。
    6.多態(tài)性比較分析。

AFLP結(jié)果示例

送樣要求
    細(xì)胞（≥10⁶）、組織（≥300mg）、血液（≥1ml）、基因組DNA（體積≥20μl，濃度≥ 50 ng/μl）。

提供結(jié)果
    原始數(shù)據(jù)、引物序列、實(shí)驗(yàn)報(bào)告、PDF格式毛細(xì)管電泳圖譜和EXCEL格式片段長(zhǎng)度。

成功案例

    某單位客戶進(jìn)行了微衛(wèi)星的檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)標(biāo)記不足，加做了AFLP標(biāo)記，利用分型圖譜最終構(gòu)建了比較成功的遺傳連鎖圖譜。

檢測(cè)項(xiàng)目