miRNA表達檢測,莖環(huán)引物設(shè)計合成,熒光定量PCR,Northern blotting
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服務(wù)商: 北京閱微基因技術(shù)有限公司 | 查看該公司所有服務(wù) >> |
背景介紹
MicroRNA(miRNA)是一類長度約19-24nt的非編碼單鏈RNA,通過堿基互補配對的方式與靶基因的3’-UTR區(qū)部分或完全互補,剪切靶基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物或者抑制轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的翻譯,從而起到轉(zhuǎn)錄后調(diào)控靶基因表達的作用。它廣泛存在于動物、植物、真菌及病毒的基因組中,調(diào)控生物體生長發(fā)育和疾病發(fā)生等過程中相關(guān)基因的表達。MiRNA的異常表達可能會導(dǎo)致生理狀態(tài)的異常和疾病的產(chǎn)生,在多種癌癥中,miRNA的表達水平會發(fā)生明顯改變,有可能起到原癌基因和抑癌基因的作用。此外,在許多其他的病變組織和細胞中也檢測到了miRNA的異常表達。因此對miRNA的表達的研究具有重要意義。
閱微基因的技術(shù)人員通過4年的探索和努力,在miRNA表達檢測方面積累了豐富經(jīng)驗,探索出多種有效的實驗方法,為您提供全面和優(yōu)質(zhì)的miRNA表達檢測服務(wù)。
服務(wù)編號 | 服務(wù)項目 | 內(nèi)容說明 | 周期 |
MIR01 | 實時定量PCR檢測 | 反轉(zhuǎn)錄和上機檢測 | 1-4周 |
MIR02 | MicroRNA Array | 用熒光定量方法進行 miRNA表達譜分析 | 2-4周 |
MIR03 | 特定類型疾病miRNA表達檢測 | 檢測肝癌、胃癌等疾病的 標志性miRNA | 1-3周 |
MIR04 | Northern Blotting | 同位素標記探針進行 miRNA的Northern雜交 | 8-12周 |
MIR05 | miRNA引物設(shè)計合成 | 設(shè)計并合成用于miRNA表 達檢測的高質(zhì)量引物 | 1周 |
MIR06 | miRNA探針制備 | 用于Northern雜交的探針 | 2周 |
運用成熟的實時定量PCR技術(shù)準確、快速地定量檢測各種組織、原代細胞及細胞系中目的microRNA的表達情況,具有靈敏度高、實驗周期短和特異性高等特點,實驗結(jié)果見圖1和圖2。
圖1 目的miRNA和內(nèi)參(U6 snRNA)的擴增曲線(儀器為Roche LC 480)
圖2 目的miRNA和內(nèi)參(U6 snRNA)的熔解曲線(儀器為Roche LC 480)
2.MicroRNA Array
利用集成在384孔板上的引物和探針組合來檢測人類、大鼠或小鼠的miRNA表達譜,只需1個工作日就能產(chǎn)生覆蓋Sanger miRbase的綜合數(shù)據(jù)集。采用TaqMan探針原理,結(jié)果準確可靠,樣品無需做重復(fù)試驗。
3.特定類型疾病miRNA表達檢測
MiRNA的表達檢測對監(jiān)測腫瘤的發(fā)生發(fā)展和各種治療手段的效果有重要意義,作為指導(dǎo)個體化藥物選擇的生物標記具有很大的臨床應(yīng)用潛力。我們針對肝癌、胃癌、胰腺癌等多種腫瘤相關(guān)標志性miRNA進行熒光定量檢測。
送樣要求
細胞(≥106)、組織(≥300mg)、血液(≥1ml)、血清(≥1.5ml)等樣品材料,總RNA(≥20μl,濃度≥ 50ng/μl)。
提供結(jié)果
服務(wù)編號 | 內(nèi)容 |
MIR01 | 引物(或探針)及序列、反轉(zhuǎn)錄膠圖、原始qRT-PCR數(shù)據(jù)和實驗報告 |
MIR02 | 原始數(shù)據(jù)和實驗報告 |
MIR03 | 原始數(shù)據(jù)和實驗報告 |
MIR04 | 雜交探針序列、探針、目的microRNA及內(nèi)參U6 snRNA雜交圖片及條帶灰度掃描結(jié)果 |
相關(guān)技術(shù)服務(wù) | ||
服務(wù)編號 | 服務(wù)項目 | 內(nèi)容說明 |
EXT04 | RNA提取 | 從血液、組織、葉片等樣本材料中提取總RNA |
EXT05 | 血清RNA提取 | 從1-5ml血清中提取總RNA |
EXT06 | 石蠟包埋組織RNA提取 | 從石蠟包埋的組織塊中提取總RNA |
相關(guān)產(chǎn)品 | |||
名稱 | 品牌 | 規(guī)格 | 說明 |
反轉(zhuǎn)錄試劑盒 | Microread | 25/100次 | 高效的逆轉(zhuǎn)錄酶,RNAase H 活性弱化,得率更高 |
加A法反轉(zhuǎn)錄試劑盒 | Microread | 25/100次 | 對miRNA末端加A后進行反轉(zhuǎn)錄 |
SYBR熒光定量試劑盒 | Microread | 1/5/10ml | 采用了化學(xué)修飾Taq酶,特異性 很好,性價比高 |
快速qPCRKit(SYBR法) | KAPA BIO | 1/5/10ml | 能夠在40分鐘內(nèi)完成反應(yīng),同時 保證擴增效率和特異性 |
快速qPCR Kit(TaqMan探針法) | KAPA BIO | 1/5/10ml |
成功案例
miRNA在癌癥的發(fā)生過程發(fā)生重要作用,某醫(yī)院客戶研究病例組和對照組的miRNA表達差異,以便確認在該機制發(fā)生過程中miRNA是否起到調(diào)控作用。
我們的優(yōu)勢
1. 使用定量PCR儀中最穩(wěn)定和常用的ABI7900HT、LC480。
2. 核心試劑采用美國原裝進口KAPA試劑,實驗結(jié)果準確,重復(fù)性好。
3. 豐富的qPCR經(jīng)驗基因類別有DNA、mRNA、miRNA,物種類別有人、鼠、雞、牧草、酵母菌、金黃色葡萄菌、病毒上清液等等。