一級序列測定

——即質(zhì)譜法全序列分析的技術(shù)服務(wù)

蛋白質(zhì)的氨基酸序列分析，包括N/C端氨基酸和全序列氨基酸序列分析。經(jīng)典的氨基酸序列分析方法主要是使用化學(xué)方法進行解析（如Edman法），這里要介紹的是使用質(zhì)譜法對氨基酸全序列進行分析。APT為客戶提供兩種質(zhì)譜方案，分別是MALDI-TOF/TOF法和LTQ-Velos法。其中MALDI-TOF/TOF方法擅長對多肽類樣品進行全序列分析（包括含有復(fù)雜修飾的多肽）；LTQ-Velos方法較適合對蛋白質(zhì)類樣品的N/C端進行氨基酸序列分析。不少多肽類的藥物分子中含有大量的非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸、各種修飾和環(huán)形結(jié)構(gòu)等等，APT為客戶提供的質(zhì)譜法全序列分析是現(xiàn)有科技能力下的最有效的序列解析方法。

“當(dāng)遇到非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸時，經(jīng)典的化學(xué)方法（Edman）法就無能為力了。”

多肽類藥物的質(zhì)譜法結(jié)構(gòu)確認(rèn)

隨著生物科技的不斷進步，多肽藥物在新藥研發(fā)中正占據(jù)越來越大的比重，而多肽分子結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性又要求對多肽藥物必須進行全面表征，以滿足新藥報批、工藝改進和專利保護的要求。目前多肽藥物的研發(fā)和表征還面臨很多挑戰(zhàn)，尤其是在重組多肽的序列確證、不同批次間產(chǎn)品的比較和質(zhì)量控制等方面。

技術(shù)指標(biāo)

質(zhì)譜法全序列分析的供試品，大多數(shù)情況下是多肽類樣品。原因是對于全序列分析而言，分子量不宜太大（盡管現(xiàn)在也有一些Top-down的質(zhì)譜方法進行全序列分析，但是目前APT并不提供這類服務(wù)工作）。多肽類樣品無論在MALDI-TOF/TOF還是LC-MS/MS中進行序列分析，分子量的范圍一般情況下都在800-4000Da之間。分子量太小，由于碎片中的序列信息不足難以分析；分子量太大，由于質(zhì)譜儀器本身的碎裂能量限制，也不能得到良好的碎片信息對氨基酸序列進行分析。

案例分析

下圖顯示的是一個多肽類藥物的全序列碎片圖譜，通過人工和算法比對，可以從圖譜中得到多肽分子的序列信息。

質(zhì)譜法全序列分析案例圖譜

Q&A

1)   質(zhì)譜方法對多肽類藥物的復(fù)雜修飾、環(huán)形結(jié)構(gòu)進行全序列解析工作。

使用質(zhì)譜方法對多肽藥物分子的全序列進行分析的基本原理為：多肽分子的分子量一般在800-4000Da，在這個范圍內(nèi)質(zhì)譜儀能夠有效地分析多肽分子的分子量，并將其破碎后成為MS2。通過記錄供試品母離子及其碎片離子信息，再與其理論序列比對，就可確定該序列中的氨基酸組成及排列方式。