主要用于抗體的制備、多肽疫苗、多肽微注射及對基因結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系的研究。
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當(dāng)前化學(xué)合成多肽的方法主要有兩種,即 Fmoc 和 t Boc ;由于 Fmoc 比 tBoc 存在更多優(yōu)勢,所以現(xiàn)在較流行的是 Fmoc 法。多肽合成是一個重復(fù)添加氨基酸的過程,合成方向是從 C 端(羧基端)向 N 端(氨基端)進行;過去多肽合成大多是在液相中進行,現(xiàn)在大多采用固相合成,從而大大的降低了每步產(chǎn)品提純的難度;為了防止副反應(yīng)的發(fā)生,合成柱和添加的氨基酸的側(cè)鏈都是預(yù)先被保護的,只有羧基端是游離的,并且在反應(yīng)之前必須先用化學(xué)試劑活化它。
具體合成步驟如下:
1 、去保護: Fmoc 保護的柱子和單體必須用一種堿性溶劑( piperidine )去除氨基的保護基團。(如圖 1 )
2 、激活和交聯(lián):下一個氨基酸的羧基被一種激活劑所激活溶解,激活的單體與游離的氨基在交聯(lián)劑的作用下交聯(lián),形成肽鍵。(如圖 2 )
3 、循環(huán):這兩步反應(yīng)反復(fù)循環(huán)直到整條肽鏈合成完畢。
4 、洗脫和脫保護:根據(jù)肽鏈所含的殘基不同,用不同的脫樹脂溶劑從柱上洗脫下來,其保護基團被一種脫保護劑( TFA )洗脫和脫保護。