雜交瘤細胞株復(fù)蘇擴大 實驗過程及注意事項

                 雜交瘤細胞株復(fù)蘇擴大

實驗過程及注意事項

郵寄活細胞時：收到細胞后直接將一支細胞轉(zhuǎn)到一個24T孔，放37℃co₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。約80%滿時擴大。加入等體積培養(yǎng)基(17%HT培養(yǎng)基)，吹打細胞面，將細胞完全吹落下來，混勻并擴至3-4孔飼養(yǎng)細胞孔，每孔補加新的培養(yǎng)基。

郵寄凍存細胞時：預(yù)先用17%胎牛血清DMEM培養(yǎng)基鋪好飼養(yǎng)層細胞，鋪好后2-7天均可以使用，飼養(yǎng)層良好的狀態(tài)是飼養(yǎng)細胞由圓形變?yōu)榱庑�，三角形等形狀。收到凍存細胞后，取出一管細胞后迅速放�?7℃水中融化，完全融化后1000轉(zhuǎn)離心3分鐘，棄上清，用600ul17%HT培養(yǎng)基懸浮，轉(zhuǎn)至24孔培養(yǎng)板中，放至co₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細胞凍存：細胞長至80%滿時將孔內(nèi)細胞上清棄掉，使用移液槍將500ul凍存液吹打細胞面，動作輕柔，轉(zhuǎn)至細胞凍存管，放入凍存盒，并轉(zhuǎn)至-80冰箱，過夜后即可轉(zhuǎn)入液氮保存。

細胞復(fù)蘇：預(yù)先用17%胎牛血清DMEM培養(yǎng)基鋪好飼養(yǎng)層細胞，鋪好后2-7天均可以使用，飼養(yǎng)層良好的狀態(tài)是飼養(yǎng)細胞由圓形變?yōu)榱庑�，三角形等形狀。從液氮�?nèi)取出一管細胞后迅速放至37℃水中融化，完全融化后1000轉(zhuǎn)離心3分鐘，棄上清，用600ul17%HT培養(yǎng)基懸浮，轉(zhuǎn)至24孔培養(yǎng)板中，放至co₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意事項：

   1.進入操作臺前所用任何物品須經(jīng)酒精擦拭消毒，以防污染。

   2.移液槍使用時不要靠近火焰，使用前應(yīng)多換氣。

   3.配置好的培養(yǎng)基放置4℃三天內(nèi)可以使用。

   4.細胞傳代與細胞復(fù)蘇所用培養(yǎng)基應(yīng)于實驗前一小時拿出，恢復(fù)至室溫方可使用。

   5.所需培養(yǎng)基和凍存液用之前進行無菌檢驗，以防污染。                 培養(yǎng)基：DMEM培養(yǎng)基+17%胎牛血清+HT

細胞凍存液：DMEM培養(yǎng)基：胎牛血清：DMSO=8：2：1

如有疑問請致電山東綠都生物食品安全檢測事業(yè)部 武經(jīng)理 18266598399