豬圓環(huán)2型病毒診斷的高敏配對(duì)@豬圓環(huán)3型病毒

豬圓環(huán)2型病毒診斷的高敏配對(duì)單抗值得信賴

豬圓環(huán)3型病毒診斷的高敏配對(duì)單抗值得期待

 

 

一，研究背景

豬圓環(huán)疫苗生產(chǎn)廠家多、疫苗類型多，細(xì)數(shù)下來有20-30種，圓環(huán)疫苗分為三大類：全病毒疫苗、嵌合疫苗、基因工程亞單位疫苗（真核表達(dá)和原核表達(dá)兩種）。我們常說圓環(huán)病是經(jīng)濟(jì)病，因?yàn)樗�直接影響生產(chǎn)效率。如何選擇優(yōu)秀的疫苗成為各級(jí)養(yǎng)殖場(chǎng)關(guān)心的問題。有文獻(xiàn)報(bào)道來自江蘇41個(gè)豬場(chǎng)272樣品中40份為PCV3陽性，且這40份樣品中28份為PCV2和PCV3共感染。 

   目前，豬圓環(huán)病的診斷是PCR和目測(cè)背部腹部的圓環(huán)斑點(diǎn)，以往，人們采用各種PCR的方法來檢測(cè)圓環(huán)病毒，但是PCR方法檢測(cè)繁瑣、對(duì)人員和環(huán)境要求高

，檢測(cè)成本高，不利于現(xiàn)場(chǎng)、基層檢測(cè)使用�，F(xiàn)在主要集中的大型的正規(guī)的檢測(cè)中心，比如各農(nóng)業(yè)大學(xué)的檢測(cè)中心等。

   應(yīng)市場(chǎng)需要，我們山東綠都生物食品安全檢測(cè)事業(yè)部歷時(shí)2年時(shí)間，開發(fā)了6株鼠單抗，經(jīng)過配對(duì)測(cè)試，找出3組均可以配對(duì)成功，并投入了市場(chǎng)進(jìn)行臨床驗(yàn)證，受到了客戶的一致好評(píng)，豬圓環(huán)2型病毒診斷的高敏配對(duì)單抗值得信賴，

豬圓環(huán)3型病毒診斷的高敏配對(duì)單抗值得期待，豬圓環(huán)3型配對(duì)單抗正在研發(fā)中。豬圓環(huán)2型配對(duì)單抗在售暢銷。

 

二，目的意義

1，所開發(fā)試紙條產(chǎn)品用于檢測(cè)各廠家圓環(huán)活疫苗中有效抗原的含量，指導(dǎo)客戶與有關(guān)監(jiān)督部門考核產(chǎn)品。

2，所開發(fā)試紙條產(chǎn)品用于檢測(cè)各廠家圓環(huán)亞單位CAP疫苗中有效抗原的含量，指導(dǎo)客戶與有關(guān)監(jiān)督部門考核產(chǎn)品。

3，所開發(fā)試紙條產(chǎn)品用于臨床病料的豬圓環(huán)病毒診斷，可用于唾液（因檢測(cè)的靈敏度高），血清，淋巴結(jié)（含毒量高）檢測(cè)豬圓環(huán)病毒。

 

三、鼠單抗質(zhì)量鑒定

①免疫熒光鑒定

1.PK15細(xì)胞鋪96孔板一個(gè)，同時(shí)接毒，按照5%接毒，每孔接50ul。

   2.48小時(shí)測(cè)定熒光。用0.01Mpbs洗三次后棄掉pbs，拍干。

   3.加入冷乙醇（-20℃存放）固定20分鐘，放入-20℃后棄掉上清，不拍板。

4.pbs洗三次，棄上清，不用拍板，吸干水分。

5.加入一抗，按照0.1 mg/ml加入。37℃防置40分鐘，pbs洗三次，吸干水分。

6.加入二抗（按1:40加入，pbs稀釋）37 ℃防置40分鐘。Pbs洗4次，吸干水分，不拍板，觀察。

7.顯微鏡亮度：1.5亮度

注意：1.做不接毒的空白細(xì)胞對(duì)照。

         2.pbs洗要同一位點(diǎn)加入，要溫柔。

         3.鋪板同步接毒。

細(xì)胞株Mabs：6E11 7F3 4E11 1E1 5C2 4E10 均具有強(qiáng)熒光。 可用于免疫熒光，WB,ELISA,IHC等體外免疫診斷。 

所開發(fā)試紙條產(chǎn)品顯示： 1，所開發(fā)試紙條產(chǎn)品用于檢測(cè)各廠家圓環(huán)活疫苗中有效抗原的含量，可以將油佐劑疫苗冷凍破乳化，但不可以用乙醇和二甲基亞砜等使蛋白變性的有機(jī)溶劑破乳化。

2，所開發(fā)試紙條產(chǎn)品用于檢測(cè)各廠家圓環(huán)亞單位CAP疫苗中有效抗原的含量。

3，所開發(fā)試紙條產(chǎn)品用于臨床病料的豬圓環(huán)病毒診斷，可用于唾液（因檢測(cè)的靈敏度高），血清，淋巴結(jié)（含毒量高）檢測(cè)豬圓環(huán)病毒。

 

配對(duì)情況：5C2-4E11；5C2-6E11

推薦使用濃度： 膠體金： 5微克/ml金液，劃線0.3-0.6mg/ml

                ELISA： 1：50 000-50 0000

                WB及免疫組化，免疫熒光：1:50-1：500

 

③ 特異性、符合率、穩(wěn)定性、靈敏度、假陽性率、假陰性率

 

 

特異性： 本配對(duì)抗體開發(fā)的試紙條產(chǎn)品只識(shí)別圓環(huán)2型病毒和亞單位cap2。

符合率：本試紙條與IDEXX產(chǎn)品符合率為98%,與PCR符合率99%。

穩(wěn)定性:  本試紙條常溫的保質(zhì)期為36個(gè)月。

靈敏度： 不低于PCR的靈敏度。

假陽性率： <5%

假陰性率:   0%

• 配套羊抗鼠二抗與萬能C線反應(yīng)蛋白； PCV純化標(biāo)準(zhǔn)陽性 抗原。

 

五、產(chǎn)品說明書附錄

 

生產(chǎn)公司：山東綠都生物科技有限公司

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