外泌體一站式服務(wù)

外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-100nm)，現(xiàn)今，其特指直徑在40-100nm的盤(pán)狀囊泡。1983年，外泌體首次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，1987年Johnstone將其命名為"exosome"。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來(lái)源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類(lèi)型均可分泌外泌體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、"運(yùn)載物"和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開(kāi)始研究。 外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡，參與細(xì)胞間通訊，對(duì)外泌體的研究興趣日益增長(zhǎng)，無(wú)論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開(kāi)發(fā)。

云序生物是外泌體研究的先驅(qū)者，我們提供多種外泌體測(cè)序服務(wù)包括：全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、circRNA測(cè)序、miRNA測(cè)序、lncRNA測(cè)序、mRNA測(cè)序。外泌體的測(cè)序研究比其它的測(cè)序研究難度高，因?yàn)橥饷隗w測(cè)序研究在前期需要提取外泌體，并對(duì)外泌體鑒定。針對(duì)外泌體的提取難度大等問(wèn)題。我們?cè)菩蛏�物為客�?hù)提供了一種快速、高效的服務(wù)方案—外泌體一站式服務(wù)。那么我們?cè)菩蛏�物一站式服�?wù)的內(nèi)容和優(yōu)勢(shì)包括：

云序生物一站式服務(wù)內(nèi)容:

云序生物一站式服務(wù)優(yōu)勢(shì):

1.外泌體一站式服務(wù)：客戶(hù)只需提供細(xì)胞上清、血清、血漿、外泌體RNA，云序生物將為您提供樣品準(zhǔn)備，文庫(kù)制備，上機(jī)測(cè)序到數(shù)據(jù)分析的整套服務(wù)。

2．商業(yè)化試劑盒抽提外泌體：云序生物使用成熟的商業(yè)化試劑盒（Qiagen）抽提外泌體，極大改善樣品的均一性�？蛻�(hù)可選擇從外泌體到RNA測(cè)序一步流程法，也可選擇先提取外泌體，在由外泌體抽取RNA兩步流程法。

3.全面的檢測(cè)所有類(lèi)型的RNA：云序生物擁有市面上最全的，針對(duì)不同物種的去rRNA試劑盒，能夠全面保留所有類(lèi)型的RNA信息。

4.鏈特異性檢測(cè)：云序生物采用鏈特異性建庫(kù)方案，可以準(zhǔn)確檢測(cè)反義RNA，提供更全面的轉(zhuǎn)錄組信息。

5.專(zhuān)業(yè)化的生物信息分析：強(qiáng)大的生物信息學(xué)團(tuán)隊(duì)，滿足客戶(hù)的各類(lèi)深入數(shù)據(jù)分析需求。

我們?cè)菩蛏�物�?duì)外泌體研究的優(yōu)勢(shì)眾多，今天主要展示我們?cè)菩蛏�物的外泌體測(cè)序一站式服務(wù)中的外泌體鑒定技術(shù)：

云序生物—外泌體鑒定

依托高通量測(cè)序揭示外泌體攜帶RNA分子對(duì)細(xì)胞功能造成影響，推動(dòng)了外泌體在疾病領(lǐng)域的研究進(jìn)程。當(dāng)前對(duì)外泌體的分離方法有很多種，例如超速離心，凝膠排阻層析，免疫沉淀，微流控芯片等，無(wú)論什么分離方法都需要對(duì)外泌體進(jìn)行鑒定。國(guó)際細(xì)胞外囊泡學(xué)會(huì)(ISEV)在2014年的發(fā)表一些指南，在指南中給定了這三個(gè)實(shí)驗(yàn)聯(lián)合鑒定外泌體（或者說(shuō)細(xì)胞外囊泡）的方法。三個(gè)實(shí)驗(yàn)是相互佐證的，其中的邏輯是這樣的：使用電鏡來(lái)觀察你的樣品中是否有與外泌體相似的經(jīng)典結(jié)構(gòu)，有經(jīng)典結(jié)構(gòu)說(shuō)明你的樣品中有外泌體或者與外泌體類(lèi)似的如溶酶體、蛋白聚團(tuán)、支原體等結(jié)構(gòu)；WB檢測(cè)發(fā)現(xiàn)樣品中具有外泌體的標(biāo)志物，那就一定程度上排除了溶酶體、蛋白聚團(tuán)、支原體等情況，但依舊不知道你樣品中整體情況，電鏡和WB的連用只能證明你的樣品中有外泌體，但是有多少、多不多這個(gè)整體情況沒(méi)辦法把握；所以就引入了NTA實(shí)驗(yàn)，NTA是為了反映你的外泌體樣品中粒子的群體特征，它是跟電鏡和WB相輔相成的。接下來(lái)詳細(xì)介紹外泌鑒定的幾大方法：

云序生物—外泌體鑒定三大方法

云序生物—透射電鏡形態(tài)鑒定

我們知道雙層囊膜結(jié)構(gòu)是外泌體重要標(biāo)志之一，由于這種雙層囊膜結(jié)構(gòu)是亞顯微結(jié)構(gòu)。普通光學(xué)顯微鏡難以觀察到此種亞顯微結(jié)構(gòu)。但透射電子顯微鏡(Transmission electron microscope, TEM)分辨率可達(dá)0.1 ~ 0.2 nm，可將被觀察物體放大至數(shù)百萬(wàn)倍，非常適合進(jìn)行外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀測(cè)。從而使TEM檢測(cè)在外泌體研究中得到很好利用。云序生物技術(shù)團(tuán)隊(duì)長(zhǎng)期從事外泌體研究，積累了豐富的外泌體電鏡樣本處理與鑒定經(jīng)驗(yàn)，為外泌體研究者提供了高質(zhì)量外泌體TEM檢測(cè)服務(wù)。 

云序生物— Western Blot鑒定

Western Blot是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳分離細(xì)胞或者組織樣本中的蛋白，經(jīng)轉(zhuǎn)膜、封閉后目標(biāo)蛋白與特有性一抗結(jié)合，再與辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過(guò)底物顯色，分析曝光條帶的位置和灰度分析獲知目標(biāo)蛋白在樣本中的表達(dá)情況。該法結(jié)合了凝膠電泳和固相免疫測(cè)定兩種技術(shù)的高特異性和高敏感性，可以對(duì)目標(biāo)蛋白進(jìn)行定型和半定量的分析。外泌體Western blot鑒定時(shí)通常會(huì)檢測(cè)哪些指標(biāo)蛋白？根據(jù)外泌體相關(guān)文獻(xiàn)的統(tǒng)計(jì)，排在前4位的檢測(cè)指標(biāo)為CD63（13/22）、TSG101(8/22)、CD9和CD81并列第三位（6/22）接著檢測(cè)較多的4個(gè)指標(biāo)為Alix（4/22）、HSP70(3/22)、flotillin (3/22)和Syntenin (2/22)；我們?cè)菩蛏�物�?duì)外泌體的鑒定時(shí)，主要是選擇外泌體表面CD63、CD9、TSG101標(biāo)記，進(jìn)行western blot鑒定。通過(guò)western blot鑒定一定程度上排除了TEM檢測(cè)無(wú)法排除的溶酶體、蛋白聚團(tuán)、支原體等。

云序生物—Nanosight粒徑密度分布分析

透射電鏡觀察能夠確認(rèn)外泌體的形態(tài)學(xué)特征，WB檢測(cè)能一定程度上排除了溶酶體、蛋白聚團(tuán)、支原體等情況，但依舊不知道樣品中整體情況，無(wú)法體現(xiàn)樣本中所有外泌體顆粒的粒徑分布情況及整體濃度；流式細(xì)胞儀可測(cè)定的粒徑大小為150nm以上，并不適合檢測(cè)游離的外泌體顆粒。云序生物采用基于馬爾文Nanosight平臺(tái)的納米顆粒追蹤分析(Nanoparticle Tracking Analysis, NTA)技術(shù)，這種技術(shù)是一種新穎的納米顆粒表征方法，它通過(guò)光學(xué)顯微鏡得到每個(gè)納米顆粒的散射光圖形，并對(duì)每個(gè)顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)進(jìn)行追蹤和分析，從而計(jì)算出納米顆粒的流體力學(xué)直徑和濃度。NTA技術(shù)已被外泌體研究領(lǐng)域認(rèn)可為外泌體表征手段之一，該技術(shù)能夠快速、精準(zhǔn)地分析外泌體粒徑分布濃度，為外泌體存在提供有力證據(jù)。

云序生物—外泌體研究流程

對(duì)外泌體的研究主要分為3個(gè)版塊：外泌體提取與純化、外泌體鑒定及RNA質(zhì)檢、外泌體RNA測(cè)序及分析。通過(guò)把外泌體鑒定放在了外泌體研究流程的中間的核心位來(lái)突出外泌體鑒定的重要性。

云序相關(guān)產(chǎn)品推薦：  

外泌體—全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序

外泌體—環(huán)狀RNA測(cè)序

外泌體—lncRNA測(cè)序

外泌體—MiRNA測(cè)序

外泌體—mRNA測(cè)序

往期回顧

外泌體轉(zhuǎn)錄組學(xué)的那些事—云序生物！

Nature子刊|云序生物聯(lián)合南京醫(yī)科大發(fā)表重要研究成果：揭示lncRNA促進(jìn)胃癌進(jìn)展的新機(jī)制！

云序客戶(hù)12分頂級(jí)文章，教你如何巧用RIP測(cè)序玩轉(zhuǎn)分子機(jī)制！

Nature Communications：環(huán)狀RNA參與干細(xì)胞分化！

什么鬼？我的環(huán)狀RNA不是miRNA海綿！

環(huán)狀RNAs解密薛甄珠之死！

震驚！環(huán)狀RNA攜海綿機(jī)制竟能登Science

環(huán)狀RNA翻譯蛋白的新篇章：具有重要生物學(xué)功能！

乳腺癌與非編碼RNA- --tsRNA的一段孽緣

 

上海云序生物科技有限公司 

Shanghai Cloud-seq Biotech Co.,Ltd

地址：上海市松江區(qū)莘磚公路518號(hào)20號(hào)樓3樓

電話：021-64878766

網(wǎng)站：www.cloud-seq.com.cn 

郵箱：market@cloud-seq.com.cn