蛋白質(zhì)磷酸化是生物界最普遍,也是最重要的一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾,20世紀(jì)50年代以來一直被生物學(xué)家看作是一種動(dòng)態(tài)的生物調(diào)節(jié)過程。在細(xì)胞中,大概有1/3的的蛋白質(zhì)被認(rèn)為是通過磷酸化修飾的。蛋白質(zhì)的磷酸化修飾與多種生物學(xué)過程密切相關(guān),如DNA損傷修復(fù)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)、信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)等。磷酸化蛋白質(zhì)及多肽的研究可以幫助人們闡述上述過程的機(jī)理,進(jìn)一步認(rèn)識(shí)生命活動(dòng)的本質(zhì)。近年來隨著蛋白質(zhì)組技術(shù)的不斷發(fā)展,蛋白質(zhì)磷酸化的研究越來越受到廣泛的關(guān)注。
蛋白質(zhì)磷酸化在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用
磷酸化多肽主要指肽鏈中的Ser、Tyr和Thr殘基的側(cè)鏈羥基被修飾成酸式磷酸酯多肽。磷酸化多肽是研究蛋白質(zhì)磷酸化過程的必不可少的工具,因此研究蛋白質(zhì)及多肽的磷酸化反應(yīng)并確定成熟簡(jiǎn)便的合成路線就變得非常重要。目前為止,多肽的磷酸化修飾主要有后磷酸化法和單體法兩種合成方法。后磷酸化法是多肽序列在樹脂上合成完后,再對(duì)其中的Ser、Tyr或Thr的側(cè)鏈羥基進(jìn)行磷酸化;單體法則是將適當(dāng)保護(hù)的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中,這種方法較后磷酸化法操作更為簡(jiǎn)便,已經(jīng)成為多肽磷酸化修飾的主要方法。
單體法修飾時(shí),磷酸化的氨基酸由于側(cè)鏈修飾的較大基團(tuán)產(chǎn)生的位阻而導(dǎo)致難以與肽鏈縮合,并且之后的氨基酸引入都會(huì)比較困難,尤其在含有多個(gè)磷酸化位點(diǎn)修飾時(shí),合成將變得異常困難,并且最終產(chǎn)物成分復(fù)雜,難以分離,產(chǎn)率極低。因此,當(dāng)肽鏈中多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行磷酸化時(shí),可以考慮采用后磷酸化法,其合成過程主要就是在多肽合成結(jié)束之后,選擇性的脫去要標(biāo)記氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)基,對(duì)于Tyr,Thr可以直接使用側(cè)鏈不保護(hù)的氨基酸進(jìn)行反應(yīng)。側(cè)鏈保護(hù)基在1%TFA/DCM條件下可以定量的脫除。后磷酸化時(shí),可以采用雙芐基亞磷酰胺,四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體,連接到羥基上,然后在過氧酸條件下氧化生成磷酰基,完成反應(yīng)。
我們提供多肽進(jìn)行兩個(gè),三個(gè),四個(gè),五個(gè)磷酸化位點(diǎn)修飾的高質(zhì)量多肽。擁有成熟的合成純化技術(shù),不斷進(jìn)取的精英團(tuán)隊(duì),國(guó)肽生物已經(jīng)成為值得信賴的多肽供應(yīng)品牌。
成功案例:
序列NH2-TERD(pS)D(pT)DVEEDSRPPGRPAEVHLERAQPFGFID(pS)D(pS)DAEEEY-CONH2,四個(gè)磷酸化修飾位點(diǎn)。
HPLC分析:
MS分析:
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合肥國(guó)肽生物科技有限公司(簡(jiǎn)稱:國(guó)肽生物TM)成立于2014年,是一家專業(yè)從事多肽產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)和銷售以及多肽技術(shù)轉(zhuǎn)讓的高新技術(shù)企業(yè)。BP公司成立之初,便成功收購(gòu)了國(guó)內(nèi)幾家多肽、抗體公司,是目前國(guó)內(nèi)的專業(yè)多肽合成、抗體制備、蛋白表達(dá)的規(guī)模型生產(chǎn)企業(yè)。
國(guó)肽生物專長(zhǎng)于熒光標(biāo)記肽、同位素標(biāo)記肽、人工胰島素、藥物肽、化妝品肽、長(zhǎng)肽困難肽等產(chǎn)品的合成與研發(fā),致力于學(xué)術(shù)水平的科研提升,搭建學(xué)術(shù)交流平臺(tái),促進(jìn)前沿、專業(yè)的學(xué)術(shù)知識(shí)推廣,推動(dòng)多肽在生物醫(yī)學(xué)材料等領(lǐng)域的研究與應(yīng)用。公司產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于藥物研發(fā),抗體的制備(包括單抗與雙抗),熒光分子探針的構(gòu)建以及細(xì)胞透膜研究、活體成像、新型材料研發(fā)和質(zhì)譜分析等研究領(lǐng)域;目前我們已經(jīng)與軍科院、天津藥物研究所、中科院物理研究所等研究機(jī)構(gòu),清華、北大、復(fù)旦等高校,以及國(guó)外著名藥企建立了長(zhǎng)期友好的合作交流關(guān)系。
國(guó)肽生物以科技創(chuàng)新為動(dòng)力,提升企業(yè)核心競(jìng)爭(zhēng)力。公司擁有一支由行業(yè)內(nèi)領(lǐng)軍人才組成的研發(fā)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì),碩士研發(fā)人員占企業(yè)員工總數(shù)的15%以上,同時(shí)公司還邀請(qǐng)國(guó)內(nèi)外生物醫(yī)學(xué)科學(xué)家擔(dān)任科學(xué)顧問。公司成立首年,通過多肽生產(chǎn)設(shè)施的精細(xì)改良、多肽研發(fā)工藝的自主創(chuàng)新,突破了多肽產(chǎn)品快速化、規(guī);a(chǎn)技術(shù)瓶頸,獲得了7項(xiàng)實(shí)用新型專利和1項(xiàng)發(fā)明專利。
國(guó)肽生物公司配備了一流的多肽合成、純化、凍干、質(zhì)量檢測(cè)與分析等精密儀器,從美國(guó)、日本等國(guó)引進(jìn)了LC-MS液質(zhì)聯(lián)用儀、超高壓液相色譜、紫外分光光度計(jì)等專用設(shè)備,以多肽合成與研發(fā)為核心,搭建起全產(chǎn)業(yè)鏈產(chǎn)品分析檢測(cè)平臺(tái),為廣大客戶提供專業(yè)可靠的多肽及相關(guān)產(chǎn)品理化性質(zhì)分析,純度分析,質(zhì)譜分析,CHN元素含量分析,紅外,紫外光譜分析等分析檢測(cè)服務(wù)。
國(guó)肽生物的創(chuàng)立,源自于公司對(duì)多肽行業(yè)未來發(fā)展的認(rèn)同,公司秉承“品質(zhì)優(yōu)先,服務(wù)至上”的經(jīng)營(yíng)理念,帶著行業(yè)責(zé)任感與使命感,立志于在全球范圍內(nèi)樹立一個(gè)民族品牌,重新引領(lǐng)肽行業(yè)的健康、快速發(fā)展。