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iTRAQ/ TMT定量蛋白質(zhì)組
采用8種或10種同位素標(biāo)簽,通過(guò)特異性標(biāo)記多肽的氨基酸基團(tuán),一次上機(jī)可實(shí)現(xiàn)8種或10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對(duì)定量
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最后更新:2020-10-16半年訪問(wèn):31
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 iTRAQ/ TMT定量蛋白質(zhì)組

iTRAQ和TMT是分別由美國(guó)AB Sciex公司和Thermo公司研發(fā)的多肽體外標(biāo)記定量技術(shù),采用8種或10種同位素標(biāo)簽,通過(guò)特異性標(biāo)記多肽的氨基酸基團(tuán),一次上機(jī)可實(shí)現(xiàn)8種或10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對(duì)定量,是近年來(lái)定量蛋白質(zhì)組學(xué)常用的高通量篩選技術(shù)。

技術(shù)原理

iTRAQ和TMT原理類(lèi)似,以iTRAQ試劑為例,該試劑結(jié)構(gòu)由報(bào)告基團(tuán)、中性平衡基團(tuán)和反應(yīng)基團(tuán)三部分組成。
不同報(bào)告基團(tuán)及其相對(duì)應(yīng)平衡基團(tuán)的質(zhì)量和都相同,而反應(yīng)基團(tuán)能與賴(lài)氨酸ε氨基和所有肽鏈的氨基末端連接,可標(biāo)記所有氨基酸。
不同標(biāo)記試劑與來(lái)源于不同樣品胰酶消化后的肽段結(jié)合,經(jīng)過(guò)色譜分離,并通過(guò)一級(jí)質(zhì)譜和二級(jí)質(zhì)譜。
平衡基團(tuán)在二級(jí)質(zhì)譜時(shí)發(fā)生中性丟失,而報(bào)告基團(tuán)在二級(jí)質(zhì)譜低質(zhì)量區(qū)域產(chǎn)生多個(gè)報(bào)告離子,其信號(hào)強(qiáng)度分別代表該標(biāo)記樣品的表達(dá)量,根據(jù)報(bào)告離子的峰面積計(jì)算同一蛋白質(zhì)同一肽段在不同樣品間的比值,從而實(shí)現(xiàn)蛋白的相對(duì)定量。

技術(shù)特征

1. 通量高,不受樣本數(shù)目的限制
單次上機(jī)最多可以同時(shí)進(jìn)行8個(gè)樣品(iTRAQ)或10個(gè)樣品(TMT)蛋白的鑒定和定量,超過(guò)8個(gè)樣品(iTRAQ)或10個(gè)樣品(TMT)可以通過(guò)設(shè)置內(nèi)參,形成搭橋,實(shí)現(xiàn)多次上機(jī)數(shù)據(jù)之間的比較,不受樣本數(shù)目的限制。
2. 定量準(zhǔn)確,重復(fù)性高
不同樣本標(biāo)記之后混樣,統(tǒng)一處理、上機(jī),與非標(biāo)記定量樣本單獨(dú)處理、上機(jī)相比,減少了樣本處理和上機(jī)造成的實(shí)驗(yàn)誤差,提高了定量的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。
3. 蛋白檢測(cè)范圍廣
無(wú)物種特異性限制,理論上可用于所有物種。蛋白范圍廣,胞漿蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白、分泌蛋白等皆可檢測(cè)。蛋白豐度和分子質(zhì)量跨度大,可檢測(cè)出低豐度蛋白、強(qiáng)堿性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。

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