同源重組胚胎干細(xì)胞建系——將線性化同源重組質(zhì)粒電轉(zhuǎn)到小鼠胚胎干細(xì)胞系R1中;進(jìn)行篩選、擴(kuò)增、挑取克隆。擴(kuò)增后Southern blot篩選正確的同源重組克隆。
鑒定后為陽性的克隆由平臺(tái)技術(shù)員擴(kuò)增。干細(xì)胞平臺(tái)為客戶保種。
嵌合體小鼠制備——將正確重組的胚胎干細(xì)胞顯微注射到小鼠囊胚中,顯微注射后的囊胚回送到代孕母鼠輸卵管或子宮中。至少提供5個(gè)嵌合率大于50%的嵌合體小鼠給客戶。但是我們不保證其具有生殖系統(tǒng)傳遞的能力。
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干細(xì)胞技術(shù)平臺(tái)作為生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所核心平臺(tái)的成員之一,在研究所加強(qiáng)發(fā)展技術(shù)支撐工作的背景下,于2006年10月正式成立()。平臺(tái)現(xiàn)有細(xì)胞培養(yǎng)室4間,其中2間為百級(jí)凈化工作間,其內(nèi)配備有百級(jí)凈化工作臺(tái)、CO2培養(yǎng)箱、冰箱、倒置相差顯微鏡、臺(tái)式低速離心機(jī)等基礎(chǔ)設(shè)施。平臺(tái)現(xiàn)有飼養(yǎng)層細(xì)胞如昆明白、CF-1、ICR、等多種品系小鼠的飼養(yǎng)層細(xì)胞,帶有單抗性基因(抗G418、嘌呤霉素)的飼養(yǎng)層細(xì)胞,帶有四抗性基因(抗G418、6-thioguanine, puromycin 和hygromycin )的飼養(yǎng)層細(xì)胞,人包皮成纖維細(xì)胞;有小鼠胚胎干細(xì)胞系如R1、E14、CE-3、D3;有小鼠的iPS細(xì)胞系;有人胚胎干細(xì)胞系如HN4。平臺(tái)還備有工具小鼠如CF-1、ICR、Neo、NOD/scid、Rosa 26 (β-gal)等。平臺(tái)現(xiàn)具備的能力:1)小鼠胚胎干細(xì)胞基因操作如同源重組、隨機(jī)插入等,建立穩(wěn)定的細(xì)胞系。2)小鼠胚胎干細(xì)胞、人胚胎干細(xì)胞定向分化操作能力。3)轉(zhuǎn)基因小鼠制備。目前,平臺(tái)可為所內(nèi)外提供胚胎干細(xì)胞相關(guān)技術(shù)培訓(xùn)和技術(shù)服務(wù)。