DNA甲基化

上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽（bisulfite）處理，用多重PCR擴增目的片段，添加barcode和測序通用接頭，在Illumina X10二代測序平臺對PCR產(chǎn)物進行高通量測序，利用生物信息學(xué)方法，精確定量計算目標區(qū)間內(nèi)的甲基化位點的甲基化狀態(tài)，在完成目標區(qū)域檢測的同時大幅降低研究費用（圖1）。
Hi-MethylSeq結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴增子高通量測序技術(shù)，可實現(xiàn)多區(qū)段、多位點的甲基化精確定量分析。本方法適用于感興趣的目的片段的甲基化研究，在大樣本中進一步確認全基因組甲基化研究挑選的陽性位點。
重亞硫酸鹽處理是甲基化分析中基因組DNA處理的金標準，是一個化學(xué)過程，可造成DNA的損傷，很難同時實現(xiàn)100%的轉(zhuǎn)換效率和保持DNA的完整性，二者需要做出一定的平衡。Hi-MethylSeq目標區(qū)域之外選取3段非CpG島序列作為內(nèi)對照，準確評估樣本的轉(zhuǎn)化率。