將委托方提供的DNA顯微注射到150個(gè)受精卵。注射后的受精卵移植到5至6只代孕母鼠輸卵管中。小鼠出生后3周,取其尾巴送至委托方手中作PCR鑒定。如果每個(gè)DNA沒(méi)有獲得至少3個(gè)首代轉(zhuǎn)基因小鼠,則免費(fèi)繼續(xù)注射100個(gè)額外的受精卵。如果第二次注射后仍未獲得首代轉(zhuǎn)基因小鼠,將不再進(jìn)行顯微注射,平臺(tái)將與委托方討論進(jìn)一步的措施。出生后4周,將小鼠隔離并送交委托方。
聯(lián)系人:丁小燕研究員 董娟
聯(lián)系電話:021-54921411 54921358
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成功案例介紹:
委托方提供線性化DNA LFM1a ,2009年3月12日和13日第一批注射62個(gè)受精卵,移入4個(gè)代孕母鼠輸卵管中,其中3只受體鼠懷孕并生產(chǎn),獲得小鼠11只,將11只小鼠剪尾抽提基因組DNA,經(jīng)PCR鑒定,獲得6只轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性小鼠,如圖所示。
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干細(xì)胞技術(shù)平臺(tái)作為生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所核心平臺(tái)的成員之一,在研究所加強(qiáng)發(fā)展技術(shù)支撐工作的背景下,于2006年10月正式成立()。平臺(tái)現(xiàn)有細(xì)胞培養(yǎng)室4間,其中2間為百級(jí)凈化工作間,其內(nèi)配備有百級(jí)凈化工作臺(tái)、CO2培養(yǎng)箱、冰箱、倒置相差顯微鏡、臺(tái)式低速離心機(jī)等基礎(chǔ)設(shè)施。平臺(tái)現(xiàn)有飼養(yǎng)層細(xì)胞如昆明白、CF-1、ICR、等多種品系小鼠的飼養(yǎng)層細(xì)胞,帶有單抗性基因(抗G418、嘌呤霉素)的飼養(yǎng)層細(xì)胞,帶有四抗性基因(抗G418、6-thioguanine, puromycin 和hygromycin )的飼養(yǎng)層細(xì)胞,人包皮成纖維細(xì)胞;有小鼠胚胎干細(xì)胞系如R1、E14、CE-3、D3;有小鼠的iPS細(xì)胞系;有人胚胎干細(xì)胞系如HN4。平臺(tái)還備有工具小鼠如CF-1、ICR、Neo、NOD/scid、Rosa 26 (β-gal)等。平臺(tái)現(xiàn)具備的能力:1)小鼠胚胎干細(xì)胞基因操作如同源重組、隨機(jī)插入等,建立穩(wěn)定的細(xì)胞系。2)小鼠胚胎干細(xì)胞、人胚胎干細(xì)胞定向分化操作能力。3)轉(zhuǎn)基因小鼠制備。目前,平臺(tái)可為所內(nèi)外提供胚胎干細(xì)胞相關(guān)技術(shù)培訓(xùn)和技術(shù)服務(wù)。