提供全套免疫印跡服務(wù)。
1. 蛋白質(zhì)抽提
a.實(shí)驗(yàn)對(duì)象為組織樣品,取適量(250~500mg)新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品,加1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑(或核蛋白抽提試劑),勻漿后抽提總蛋白(或核蛋白)。
b.實(shí)驗(yàn)對(duì)象為細(xì)胞樣品,每份樣品取1×106~1×107細(xì)胞,PBS清洗細(xì)胞,去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑(或核蛋白抽提試劑)抽提總蛋白(或核蛋白)。
2.蛋白質(zhì)定量
用經(jīng)典的Bradford法測(cè)定樣品濃度。
3. 免疫印跡實(shí)驗(yàn)
客戶方需提供:
1.第一抗體(建議客戶定購國外公司的一抗,以國外文獻(xiàn)中報(bào)導(dǎo)的抗體為佳,如CST、ABcam、 Zymed等著名抗體公司)
2.預(yù)實(shí)驗(yàn)樣本
3.正式實(shí)驗(yàn)樣本
同時(shí)希望客戶能提供相應(yīng)的背景材料以利實(shí)驗(yàn)順利完成,背景材料包括:樣本描述,目的蛋白相關(guān)資料,必要的相關(guān)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)內(nèi)容如陽性對(duì)照等等。
服務(wù)流程:
預(yù)實(shí)驗(yàn):
如樣本數(shù)目比較大、或樣本量稀少比較珍貴時(shí)建議做預(yù)實(shí)驗(yàn),以檢測(cè)抗體質(zhì)量和客戶的樣本情況。由于抗體的質(zhì)量對(duì)于實(shí)驗(yàn)的成敗至關(guān)重要,建議選用有質(zhì)量保證的品牌抗體。
具體流程如下:
1.客戶樣本做蛋白含量測(cè)定,確定合適的上樣量。
客戶提供的樣本若干2-3個(gè)做對(duì)照基因β-actin檢測(cè),如此步結(jié)果正常,進(jìn)入目標(biāo)基因測(cè)試。
2.根據(jù)客戶提供的一抗和客戶提供的樣本做目標(biāo)基因測(cè)試,確定抗體的合適用量摸定反應(yīng)條件,一抗用量選用說明書推薦的上限偏高(最濃的)濃度如說明書推薦一抗稀釋度在1:200,到1:20000之間,則我們初次實(shí)驗(yàn)選用1:100,如實(shí)驗(yàn)沒有信號(hào),再次確認(rèn)后通知客戶換抗體,如結(jié)果有目標(biāo)信號(hào)則再根據(jù)結(jié)果摸定合適的反應(yīng)條件,進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。
正式實(shí)驗(yàn):
根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)摸定的反應(yīng)條件,逐步分階段進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn),同時(shí)隨時(shí)通知客戶反應(yīng)進(jìn)程,調(diào)整實(shí)驗(yàn)。
服務(wù)方提供:蛋白顯色圖譜。
驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn):蛋白顯色圖譜,條帶清晰,對(duì)照基因基本一致。
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