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Sanger測(cè)序服務(wù)——BAC末端測(cè)序
我們?yōu)槟峁┨羧】寺　⒓?xì)菌培養(yǎng)、BAC/COSMID/FOSMID抽提、DNA測(cè)序一整套的服務(wù)。
服務(wù)類(lèi)別：測(cè)序/合成總訪問(wèn)：4525
最后更新：2015-7-14半年訪問(wèn)：24
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Sanger測(cè)序服務(wù)——BAC末端測(cè)序

詳細(xì)描述：
細(xì)菌人工染色體（Bacterial Artificial Chromosome，BAC）文庫(kù)的構(gòu)建是進(jìn)行基因組研究的一項(xiàng)重要基礎(chǔ)性工作，特別是對(duì)大基因組及超大基因組生物來(lái)說(shuō)更是如此，在物理作圖、基因圖位克隆、基因結(jié)構(gòu)和調(diào)控等研究中發(fā)揮了重要作用。BAC末端測(cè)序技術(shù)通過(guò)測(cè)定插入片段兩端的序列，能夠迅速而精確地進(jìn)行序列拼裝，并確定基因組序列結(jié)構(gòu)的多態(tài)性，如倒置和易位等，在基因組全序列測(cè)序中有著舉足輕重的作用。
 
BAC末端測(cè)序難點(diǎn)
一般來(lái)說(shuō)，BAC測(cè)序比質(zhì)粒或PCR產(chǎn)物的測(cè)序要困難得多。主要難點(diǎn)體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：
1.      BAC質(zhì)粒插入片段長(zhǎng)（一般大于100 Kb），容易形成二級(jí)結(jié)構(gòu)，而二級(jí)結(jié)構(gòu)區(qū)域后的DNA鏈可能會(huì)因延伸不夠充分而造成測(cè)序異常。
2.      BAC測(cè)序需要毫克級(jí)高純度的DNA，從而獲得充足信號(hào)，以利于準(zhǔn)確的堿基信號(hào)檢出和最大讀長(zhǎng)的獲得。但是BAC質(zhì)粒在細(xì)菌中為單拷貝或低拷貝，DNA提取和純化難度很大。
3.      測(cè)序反應(yīng)完成后，產(chǎn)物需進(jìn)行純化才能上機(jī)（ABI3730xl）檢測(cè)。常規(guī)的純化方法不能夠完全去除殘留的熒光染料，這會(huì)導(dǎo)致序列彩圖中出現(xiàn)嚴(yán)重的干擾峰。
 
美吉優(yōu)勢(shì)
1.      DNA提取環(huán)節(jié)
利用自主研發(fā)的BAC克隆DNA提取試劑和獨(dú)特的提取方法，美吉生物可以利用96孔深孔板進(jìn)行BAC克隆的培養(yǎng)和批量化DNA提取，獲得的BAC DNA的質(zhì)量和純度完全滿足測(cè)序需求。
2.      測(cè)序反應(yīng)環(huán)節(jié)
對(duì)測(cè)序反應(yīng)體系進(jìn)行了優(yōu)化，在反應(yīng)體系中添加了以MgCl2為主要成分的自制緩沖液，增加了BigDye中Taq酶的活性，從而極大提高了測(cè)序的質(zhì)量和成功率。
3.      測(cè)序反應(yīng)純化環(huán)節(jié)
采用BigDye XTerminator純化試劑盒，可穩(wěn)定地去除BAC末端測(cè)序中的染料污染，從而消除了干擾峰的出現(xiàn)，并且能夠顯著增強(qiáng)測(cè)序數(shù)據(jù)的信號(hào)強(qiáng)度。


 上圖：乙醇純化法BAC末端測(cè)序，下圖：XTerminator純化法BAC末端測(cè)序峰圖

收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)
樣本形式
測(cè)序周期
價(jià)格
Cosmid/Fosmid
5工作日
120元/反應(yīng)
BAC
6工作日
150元/反應(yīng)

 

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