文庫構(gòu)建服務(wù)——cDNA文庫構(gòu)建

一. SMART cDNA 文庫構(gòu)建 
        以總RNA為模板，采用SMART方法將mRNA在體外反轉(zhuǎn)錄成cDNA，與適當質(zhì)粒載體連接后轉(zhuǎn)化受體菌，則每個細菌含有一段cDNA，并能繁殖擴增，這種包含著細胞全部mRNA信息的cDNA克隆群體稱為某組織或細胞的cDNA文庫。美吉生物具有眾多的SMART cDNA文庫構(gòu)建成功案例，可以構(gòu)建不同材料來源的cDNA文庫。
 
文庫特點 
1. 材料用量少：只需1 μg總RNA。
2. 全長比率高：采用Clontech SMART專利技術(shù)，全長比率一般在30%以上。
3. 實驗周期短：最快2～3周即可完成整個文庫構(gòu)建。
 
提供結(jié)果 
1. 產(chǎn)物電泳圖譜
2. 文庫連接液，保存于－20℃
3. 文庫評價數(shù)據(jù)，包括庫容量，插入片段平均長度，重組效率，cDNA完整性評價等
4. 實驗報告
 
應(yīng)用領(lǐng)域 
1. 物種種質(zhì)資源開發(fā)與保護
2. 物種遺傳功能分析
3. 基因克隆與表達
4. 新基因的發(fā)現(xiàn)
5. 功能基因的篩選
 
二. 抑制性消減雜交 cDNA 文庫技術(shù)（ SSH ） 
        抑制性消減雜交文庫技術(shù)結(jié)合了抑制消減雜交、基因文庫和斑點雜交等多種技術(shù)，能高效篩選出差異表達基因。與傳統(tǒng)的DD-PCR、SAGE及cDNA-RDA等技術(shù)相比，具有低豐度mRNA富集率高、假陽性低、靈敏度高、重復性好等特點。該技術(shù)尤其適用于Genome尚不完全清晰的物種及某些特殊生物材料的研究。

服務(wù)項目 
1. Clontech SSH文庫（差異基因片段文庫）
2. cDNA消減文庫（差異基因cDNA文庫）
3. SMART cDNA消減文庫（差異基因全長cDNA文庫）

技術(shù)特點 
1. 只需要0.5～2 μg的mRNA或最低只需50ng的總RNA。
2. 可以在物種遺傳信息未知的情況下，進行多樣本差異基因高通量篩選，尤其適用于非模式生物（植物\昆蟲\魚類等）的研究。具有通量差異的基因以克隆形式得以保存，便于后續(xù)研究（測序、RACE、引物設(shè)計等）。

提供結(jié)果 
1. SSH差減文庫（PCR產(chǎn)物）
2. 逆向斑點雜交篩選到的差異表達基因的實物克隆及序列信息（如合作伙伴要求測序）
3. 實驗報告：構(gòu)建過程說明、圖片、質(zhì)控信息

三. 均一化 cDNA 文庫構(gòu)建 
        構(gòu)建均一化cDNA文庫，使文庫中各表達基因所對應(yīng)的cDNA拷貝數(shù)相等或接近，能有效克服基因轉(zhuǎn)錄水平上的巨大差異給文庫篩選和分析帶來的障礙，有利于研究基因的表達和序列分析。通過構(gòu)建均一化文庫，以獲得更全面的基因信息，可以節(jié)省大量的測序費用，性價比高。美吉生物采用先進的cDNA文庫均一化技術(shù)，能減少高豐度表達基因10～100倍，有效富集低豐度表達基因，從而大大降低了數(shù)據(jù)冗余率。

文庫特點 
1. 材料用量少，文庫構(gòu)建只需1μg總RNA。
2. 技術(shù)成熟，均一化程度高，無需反復雜交過程。
3. 均一化過程對插入片段大小無明顯影響。
4. 均一化后，減低高豐度表達基因10～100倍。

提供結(jié)果 
1. 文庫連接液，保存在－20℃

2. 實驗報告：文庫評價數(shù)據(jù)（庫容量，插入片段平均長度，重組效率，cDNA完整性評價， 冗余度評價）、實驗流程、產(chǎn)物電泳圖譜及均一化前后管家基因?qū)Ρ葓D

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